24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3686  |  回复: 17

不爱做实验

银虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-15 21:23:43
谢谢 下次减少抗生素的量试试...

客气,一般是100ml空白培养基加100ul抗生素,你也可以参考别人的试试,祝顺利。。。
11楼2014-04-15 22:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

咱们做的内容很相似呀,我也是连接转化,挑菌,可是我假阳性率太高了,上次挑了四十个居然全部是假阳性,PCR估计是载体自连。这个就比较郁闷了。 另外,我的菌落长得也比较慢,大概的16h以后才可以调。我用的takara pmd18-t载体,说明书说的是16度半小时,可是我水浴半小时,最后结果是不长。后面调节4度过夜连接,长到时长了,就是出现了前面说的40个全部是假阳性……
  你连接用的什么载体,怎么控制温度的?连接比例也是5:3:1:1吗?
12楼2014-04-15 23:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-15 23:04:27
咱们做的内容很相似呀,我也是连接转化,挑菌,可是我假阳性率太高了,上次挑了四十个居然全部是假阳性,PCR估计是载体自连。这个就比较郁闷了。 另外,我的菌落长得也比较慢,大概的16h以后才可以调。我用 ...

takala的pmd 19-t,在pcr仪里16℃连接过夜,连接比例是2ulDNA,2.5ul solution,0.5ul 载体
越努力越幸运
13楼2014-04-18 10:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-18 10:14:36
takala的pmd 19-t,在pcr仪里16℃连接过夜,连接比例是2ulDNA,2.5ul solution,0.5ul 载体...

这样5ul的体系可以吗?我是takala的pmd 18-t 载体,昨晚测了三十个,终于有四个是正确的
弱弱的问下,PCR过夜,怎么设置温度
14楼2014-04-18 11:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-18 11:08:18
这样5ul的体系可以吗?我是takala的pmd 18-t 载体,昨晚测了三十个,终于有四个是正确的
弱弱的问下,PCR过夜,怎么设置温度...

我一直用的这个体系,从最后结果来看,效果还是不错滴,你可以试试啊
不是pcr过夜,是把配好的连接体系放到pcr仪里,程序设置成16℃(仅此一步)时间嘛我都是设成∞,到时候自己收就是了,你晚上做了早上收,不就过夜啦。
今天我的测序结果出来了,还不错,都测出来了,之前挑的单克隆大部分也都是阳性的,菌落虽然小点儿但是结果还不错。
你在挑菌的时候,要捡大小合适(不要太大的)、远离菌落群的单菌落,还有你最后菌落PCR的时候,最好用自己的特异性引物做,降低假阳性的几率。
连接、转化每一步都严格把关,总会成功的
祝你好运
越努力越幸运
15楼2014-04-18 19:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dispy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-18 19:20:36
我一直用的这个体系,从最后结果来看,效果还是不错滴,你可以试试啊
不是pcr过夜,是把配好的连接体系放到pcr仪里,程序设置成16℃(仅此一步)时间嘛我都是设成∞,到时候自己收就是了,你晚上做了早上收,不就 ...

您好,我想问下我也是用takala的pmd 19-t载体,连了4个条带,只有两个菌落PCR有结果,另外两个没有跑出来,但是都是挑的白斑,难道是假阳性么?我链接用了2h,是时间太短了没连上?说明书说30min就可以啊?
16楼2014-05-06 00:26:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DH5a长的时间在10-16个小时都比较正常,不用担心。
17楼2014-05-06 04:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ycyznxb

新虫 (初入文坛)

天,,我也是相同情况,求解决方法,一直不知道为什么

发自小木虫Android客户端
18楼2018-10-10 14:39:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 柠檬可乐星 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物与医药273求调剂 +5 荔题南墙 2026-04-05 5/250 2026-04-05 22:04 by imissbao
[考研] 求助071001调剂!!! +3 黄守松 2026-04-05 4/200 2026-04-05 21:01 by barlinike
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 270求调剂 +9 小杰pp 2026-03-31 11/550 2026-04-05 11:02 by 风雨无晴
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 材料科学与工程调剂 +19 深V宿舍吧 2026-03-30 20/1000 2026-04-04 22:13 by hemengdong
[考研] 085600调剂 +4 1amJJ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:53 by hemengdong
[考研] 359求调剂 +7 hhhhaaaa$ 2026-04-04 7/350 2026-04-04 18:49 by imissbao
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +19 Doleres 2026-03-31 20/1000 2026-04-04 16:44 by 啊俊!
[考研] 复试调剂 +6 范根培 2026-04-04 6/300 2026-04-04 14:27 by 土木硕士招生
[考研] 求材料调剂,一志愿郑州大学289分 +15 硕星赴 2026-04-03 15/750 2026-04-04 01:01 by userper
[考研] 320求调剂 +5 振—TZ 2026-04-02 5/250 2026-04-03 14:42 by fxue1114
[考研] 085501一志愿天工大,机械专硕求调剂,跨材料 +3 33上 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:08 by 1753564080
[考研] 266分,一志愿电气工程,本科材料,求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 9/450 2026-04-03 12:05 by 1753564080
[考研] 抱歉 +5 田洪有 2026-03-30 5/250 2026-04-03 10:24 by linyelide
[考研] 309求调剂 +14 呆菇不是戴夫 2026-04-02 14/700 2026-04-03 09:42 by 蓝云思雨
[考研] 0856材料与化工调剂,339 +14 10213207 2026-03-31 14/700 2026-04-02 21:01 by 1104338198
[考博] 材料工程专业硕士申博 +3 麟正宇 2026-03-30 3/150 2026-04-02 15:04 by greychen00
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +9 双马尾痞老板2 2026-04-01 9/450 2026-04-02 12:14 by oooqiao
[考研] 求调剂推荐 +3 南山南@ 2026-04-01 3/150 2026-04-02 12:09 by xiaoranmu
信息提示
请填处理意见