24小时热门版块排行榜    

查看: 4035  |  回复: 17

不爱做实验

银虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-15 21:23:43
谢谢 下次减少抗生素的量试试...

客气,一般是100ml空白培养基加100ul抗生素,你也可以参考别人的试试,祝顺利。。。
11楼2014-04-15 22:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

咱们做的内容很相似呀,我也是连接转化,挑菌,可是我假阳性率太高了,上次挑了四十个居然全部是假阳性,PCR估计是载体自连。这个就比较郁闷了。 另外,我的菌落长得也比较慢,大概的16h以后才可以调。我用的takara pmd18-t载体,说明书说的是16度半小时,可是我水浴半小时,最后结果是不长。后面调节4度过夜连接,长到时长了,就是出现了前面说的40个全部是假阳性……
  你连接用的什么载体,怎么控制温度的?连接比例也是5:3:1:1吗?
12楼2014-04-15 23:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-15 23:04:27
咱们做的内容很相似呀,我也是连接转化,挑菌,可是我假阳性率太高了,上次挑了四十个居然全部是假阳性,PCR估计是载体自连。这个就比较郁闷了。 另外,我的菌落长得也比较慢,大概的16h以后才可以调。我用 ...

takala的pmd 19-t,在pcr仪里16℃连接过夜,连接比例是2ulDNA,2.5ul solution,0.5ul 载体
越努力越幸运
13楼2014-04-18 10:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-18 10:14:36
takala的pmd 19-t,在pcr仪里16℃连接过夜,连接比例是2ulDNA,2.5ul solution,0.5ul 载体...

这样5ul的体系可以吗?我是takala的pmd 18-t 载体,昨晚测了三十个,终于有四个是正确的
弱弱的问下,PCR过夜,怎么设置温度
14楼2014-04-18 11:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-18 11:08:18
这样5ul的体系可以吗?我是takala的pmd 18-t 载体,昨晚测了三十个,终于有四个是正确的
弱弱的问下,PCR过夜,怎么设置温度...

我一直用的这个体系,从最后结果来看,效果还是不错滴,你可以试试啊
不是pcr过夜,是把配好的连接体系放到pcr仪里,程序设置成16℃(仅此一步)时间嘛我都是设成∞,到时候自己收就是了,你晚上做了早上收,不就过夜啦。
今天我的测序结果出来了,还不错,都测出来了,之前挑的单克隆大部分也都是阳性的,菌落虽然小点儿但是结果还不错。
你在挑菌的时候,要捡大小合适(不要太大的)、远离菌落群的单菌落,还有你最后菌落PCR的时候,最好用自己的特异性引物做,降低假阳性的几率。
连接、转化每一步都严格把关,总会成功的
祝你好运
越努力越幸运
15楼2014-04-18 19:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dispy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-18 19:20:36
我一直用的这个体系,从最后结果来看,效果还是不错滴,你可以试试啊
不是pcr过夜,是把配好的连接体系放到pcr仪里,程序设置成16℃(仅此一步)时间嘛我都是设成∞,到时候自己收就是了,你晚上做了早上收,不就 ...

您好,我想问下我也是用takala的pmd 19-t载体,连了4个条带,只有两个菌落PCR有结果,另外两个没有跑出来,但是都是挑的白斑,难道是假阳性么?我链接用了2h,是时间太短了没连上?说明书说30min就可以啊?
16楼2014-05-06 00:26:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DH5a长的时间在10-16个小时都比较正常,不用担心。
17楼2014-05-06 04:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ycyznxb

新虫 (初入文坛)

天,,我也是相同情况,求解决方法,一直不知道为什么

发自小木虫Android客户端
18楼2018-10-10 14:39:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 柠檬可乐星 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+3 Tsingking1 2026-08-27 14/700 2026-09-01 08:29 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
请填处理意见