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salead

新虫 (初入文坛)

[交流] LH-20凝胶层析分离透明质酸 流动相能用乙酸乙酸钠缓冲液吗? 怎么平衡柱子? 已有2人参与

如题所述,我需要用LH-20的凝胶柱分离透明质酸(一种多糖)的酶解液,目前使用的流动相是0.1mol/L的乙酸乙酸钠,UV值本来是需要设210nm,测多糖末端还原端的吸收值,但实际中在这个UV值下,用乙酸乙酸钠buffer无法平衡柱子(如下图 蓝色线  红色为232nm下平衡柱子的情况),平衡了约3个柱体积基线仍然很杂;

请问有哪位大神知道可能是什么原因吗?是因为乙酸乙酸钠的buffer对这个UV值也有吸收吗?

大家用LH-20的时候,用过无机的缓冲液吗?

LH-20凝胶层析分离透明质酸 流动相能用乙酸乙酸钠缓冲液吗? 怎么平衡柱子?
pinghengzhuzi.png
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salead

新虫 (初入文坛)

蓝色的杂线是用乙酸乙酸钠平衡柱子的情况(UV=210nm),一直无法平衡...
大家用LH-20的时候,UV值通常怎么设啊? 怎么平衡柱子啊。。。。。
求大家帮忙啊
2楼2014-04-12 15:02:02
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stephen1102

金虫 (正式写手)

★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by salead at 2014-04-12 15:02:02
蓝色的杂线是用乙酸乙酸钠平衡柱子的情况(UV=210nm),一直无法平衡...
大家用LH-20的时候,UV值通常怎么设啊? 怎么平衡柱子啊。。。。。
求大家帮忙啊

无机盐在210 nm处对吸光值干扰很大的,你用乙酸乙酸钠平衡,肯定不行的。
戒骄戒躁,做好自己
3楼2014-06-23 17:23:43
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torekill

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lz没学好紫外可见光谱

以水做溶剂,乙酸在204nm处有n-π*的跃迁,因其跃迁能量大,所以在较低波长处有吸收

肯定会造成基线不平的,lz尝试换一个磷酸二氢钾 氢氧化钠缓冲溶液吧
4楼2014-06-25 08:32:17
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