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[求助]
B16F10黑素瘤细胞中的酪氨酸酶活性测定求助~~~！！！ 已有1人参与
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各位虫友们好，本人在做药物对B16F10细胞内酪氨酸酶活性影响的实验，按照文献上的方法在96孔板中接一定量细胞，待细胞贴壁后倒去培养基，用PBS（PH=6.8）清洗两遍，后加1%的TritonX-10（PBS溶，PH=6.8）冻于-80℃ 1h后室温融化，37℃孵育10min，加入0.2%的L-Dopa 30 μl 37℃反应，文献里基本都是短则30min长则至多2h就能测出活力，可是我的2h内完全没有看到吸光度值的变化，由于实验条件有限，酶标仪不能控温，所以37℃反应基本在细胞培养箱中进行，但我觉得应该不是这个原因，不知道哪位大神做过这个实验，可否指点一二，到底是哪儿出了问题呢？？~~~！！！！急求答案，谢谢！！！！！！ 另外，文献里有的L-Dopa浓度可达1%，我这试了各种方法最多就只能溶到0.4%，不知是否有什么溶解多巴的好办法呢？？！！！ |
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