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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » B16F10黑素瘤细胞中的酪氨酸酶活性测定求助~~~！！！
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sly12315

新虫 (初入文坛)

[求助] B16F10黑素瘤细胞中的酪氨酸酶活性测定求助~~~！！！ 已有1人参与

各位虫友们好，本人在做药物对B16F10细胞内酪氨酸酶活性影响的实验，按照文献上的方法在96孔板中接一定量细胞，待细胞贴壁后倒去培养基，用PBS（PH=6.8）清洗两遍，后加1%的TritonX-10（PBS溶，PH=6.8）冻于-80℃ 1h后室温融化，37℃孵育10min，加入0.2%的L-Dopa 30 μl 37℃反应，文献里基本都是短则30min长则至多2h就能测出活力，可是我的2h内完全没有看到吸光度值的变化，由于实验条件有限，酶标仪不能控温，所以37℃反应基本在细胞培养箱中进行，但我觉得应该不是这个原因，不知道哪位大神做过这个实验，可否指点一二，到底是哪儿出了问题呢？？~~~！！！！急求答案，谢谢！！！！！！
      另外，文献里有的L-Dopa浓度可达1%，我这试了各种方法最多就只能溶到0.4%，不知是否有什么溶解多巴的好办法呢？？！！！
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1楼 2014-04-10 00:49:30
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蘑菇找?椫�

银虫 (初入文坛)
可以尝试用下，TRIS-HCL溶液溶解。
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2楼2015-04-21 23:09:04
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you5056

新虫 (初入文坛)
我也是初学者   马上也要做这个实验了 ？请问一些你的PH=6.8的PBS是自己配置的么？怎么配置呀？可以用缓冲溶液公式计算吗？
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3楼2016-03-01 11:28:41
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豆豆豆豆等等

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也遇到了同样的问题，没有颜色变化是什么原因呢，请问楼主是怎么解决的呢？
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4楼2021-03-22 15:30:35
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