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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞培养
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weiing

铜虫 (小有名气)

[交流] 细胞培养

本人在实验室培养过程中，前期细胞密度均处于非常好的状态，细胞活率也一直维持在98%以上，在培养最后一天,细胞活率极具下降，一天之内从98%下降到60%左右，培养结束，整个培养基本无平台期，导致产量受到影响。

细胞株：CHO-S
基础培养基：商业化培养基
补料培养基：商业化培养基
接种密度：0.4-0.6*10^6cells/mL
最高细胞密度（day7-8）13*10^6cells/mL
达到细胞最高密度后能维持1-2天后，细胞大量死亡。

已做工作：降温（降温对延长时间无改善）
          氨基酸分析（现有数据表明氨基酸均处于比较合理状态，至少没有极度缺乏氨基酸）
          增加补料体积（无改善）
          在基础与补料中加植物水解物（微量增加产量，但对于培养时间延长无影响）
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1楼 2014-04-09 22:41:25
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weiing

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小周 at 2014-04-13 21:23:52
根据你的推论，细胞猝死是因为某一种或几种营养成分的缺乏。它（它们）在基础培养基中存在，而补料培养基中缺乏，或是没有，因此造成了培养后期营养的缺乏。
换种补料培养基试试。

取少量培养后期细胞（猝死前 ...

换了补料了，能有缓解，但是也存在其它质量的问题。

你后面这个建议不错，可以试一试。
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13楼2014-04-14 13:50:52
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主的细胞培养几天后活率下降？
不管是哪种细胞，培养几天后，状态都会变差，此时需要重新传代。没有哪种细胞可以维持数天状态依然良好。
对于大多数CHO细胞来说，三天后细胞状态都会下降，楼主已经做到七八天，已经是相当长的时间了。
如果细胞密度已经够高了，就可以传代并扩大体系，或者冻存备用。
如果细胞密度不高，可以考虑消化贴壁细胞，离心换新培养基，让细胞重新贴壁生长，有可能会改善状态。
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2楼2014-04-10 06:15:53
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weiing

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangyue115 at 2014-04-10 06:15:53
楼主的细胞培养几天后活率下降？
不管是哪种细胞，培养几天后，状态都会变差，此时需要重新传代。没有哪种细胞可以维持数天状态依然良好。
对于大多数CHO细胞来说，三天后细胞状态都会下降，楼主已经做到七八天， ...

是细胞培养表达蛋白，用的Fed-batch工艺。
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3楼2014-04-10 08:22:13
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by weiing at 2014-04-10 08:22:13
是细胞培养表达蛋白，用的Fed-batch工艺。...

你用的是驯化过的细胞吗？培养基里有血清吗？如果是驯化过的细胞，说明驯化的不是太成功。如果是有血清的，可以考虑调整血清浓度。
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4楼2014-04-11 13:40:25
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