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weiing

铜虫 (小有名气)

[交流] 细胞培养

本人在实验室培养过程中,前期细胞密度均处于非常好的状态,细胞活率也一直维持在98%以上,在培养最后一天,细胞活率极具下降,一天之内从98%下降到60%左右,培养结束,整个培养基本无平台期,导致产量受到影响。

细胞株:CHO-S
基础培养基:商业化培养基
补料培养基:商业化培养基
接种密度:0.4-0.6*10^6cells/mL
最高细胞密度(day7-8)13*10^6cells/mL
达到细胞最高密度后能维持1-2天后,细胞大量死亡。

已做工作:降温(降温对延长时间无改善)
          氨基酸分析(现有数据表明氨基酸均处于比较合理状态,至少没有极度缺乏氨基酸)
          增加补料体积(无改善)
          在基础与补料中加植物水解物(微量增加产量,但对于培养时间延长无影响)
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小周

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by weiing at 2014-04-13 20:36:38
第一:细胞密度有继续上升的空间,主要是死的太快用温度限制其生长了。
第二:细胞生长的为抗体,一般经验而言对细胞没有毒性
第三:葡萄糖是肯定没有耗尽的,gln是一直有流加,但是glumate一直在累积,证明不能 ...

根据你的推论,细胞猝死是因为某一种或几种营养成分的缺乏。它(它们)在基础培养基中存在,而补料培养基中缺乏,或是没有,因此造成了培养后期营养的缺乏。
换种补料培养基试试。

取少量培养后期细胞(猝死前一两天),离心后,用等量基础培养基重悬一下,放摇瓶中培养,看看细胞会不会死。不处理的做对照。(该方法不一定能行,细胞可能已经进入凋亡)
10楼2014-04-13 21:23:52
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主的细胞培养几天后活率下降?
不管是哪种细胞,培养几天后,状态都会变差,此时需要重新传代。没有哪种细胞可以维持数天状态依然良好。
对于大多数CHO细胞来说,三天后细胞状态都会下降,楼主已经做到七八天,已经是相当长的时间了。
如果细胞密度已经够高了,就可以传代并扩大体系,或者冻存备用。
如果细胞密度不高,可以考虑消化贴壁细胞,离心换新培养基,让细胞重新贴壁生长,有可能会改善状态。
2楼2014-04-10 06:15:53
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weiing

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangyue115 at 2014-04-10 06:15:53
楼主的细胞培养几天后活率下降?
不管是哪种细胞,培养几天后,状态都会变差,此时需要重新传代。没有哪种细胞可以维持数天状态依然良好。
对于大多数CHO细胞来说,三天后细胞状态都会下降,楼主已经做到七八天, ...

是细胞培养表达蛋白,用的Fed-batch工艺。
3楼2014-04-10 08:22:13
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by weiing at 2014-04-10 08:22:13
是细胞培养表达蛋白,用的Fed-batch工艺。...

你用的是驯化过的细胞吗?培养基里有血清吗?如果是驯化过的细胞,说明驯化的不是太成功。如果是有血清的,可以考虑调整血清浓度。
4楼2014-04-11 13:40:25
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