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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 已经快PCR折磨疯了。。救命呀
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by zhangtao110 at 2014-04-10 17:29:02
pcr产物一般不是用琼脂糖凝胶电泳跑一下么，在紫外光下观察产物大小，可以胶回收纯化一下，然后遗传转化，再测序么？
...

我的他们说直接将产物送去公司测序
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有点矛盾。有点纠结
21楼2014-04-11 02:22:57
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whitewave

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-09 20:59:46
我已经更改过好多条件了。。。http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7236813这是我最近一下做的，这样的我可以拿去测序，我还不会切胶呢。。。折磨呀...

看了大家给你出的主意，比较全面，我先问个问题，你这个胶是银染还是怎么处理的，呈这样，不是一般都EB紫外曝光黑白色吗？关于配胶这些所有的你不懂该看分子克隆！我只提几个建议，你配胶用的TAE这样东西时间久吗，有人用了正常吗？胶弯的除了胶孔还有一个比较少见的就是电泳的电阻丝就比较弯！你是新手建议你把目标基因发来大家给你设计下引物！有人建议你跑清水阴性对照，我就没有搞明白，东西都没有确定跑出来，不做阳性对照确定操作跟试剂没有问题，整那些有用？就这么多了！凌晨三点了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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天生我才
22楼2014-04-11 02:58:54
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-10 14:51:07
我老板说韩国的好一些？我不懂呀。。。为什么不直接在欧盟做呢。。。...

不知道为何要送去韩国测序，只能呵呵了。真要测序的话如楼上一个虫友说的华大，invitrogen，金唯智等等公司都可以了，哪怕是做全基因组测序，多给点钱，没有攻不下来的
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你的日子如何，你的力量也必如何！
23楼2014-04-11 11:36:18
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lsg-ll

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-09 20:47:07
我跑出来的带是模糊的，跑胶的目的就是为了看PCR的产品有无问题？...

胶回收 主要目的还是纯化
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人生就像一直虫子，爬呀爬呀
24楼2014-04-11 15:46:23
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jimewosen

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by ljj0720 at 2014-04-09 20:34:07
直接送PCR products去测序可以，切胶之回收之后再送当然也可以，切胶回收后，浓度会高一些，记得 测序的时候给他们引物，祝好运

切胶后浓度会更低

[ 发自小木虫客户端 ]
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25楼2014-04-11 16:34:14
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by whitewave at 2014-04-11 02:58:54
看了大家给你出的主意，比较全面，我先问个问题，你这个胶是银染还是怎么处理的，呈这样，不是一般都EB紫外曝光黑白色吗？关于配胶这些所有的你不懂该看分子克隆！我只提几个建议，你配胶用的TAE这样东西时间久吗， ...

胶什么叫银然。。。我的胶就是加了一个叫gel red的东西。。1ul
他们跑的DNA模板还可以啊。。。
我用的是TBE 我的引物应该没有问题  因为我之前用同样的引物在别的城市做过十个样 是成功的。。。我昨天用的2%的胶 还是不行 有的人建议我用低一点1.2或者1的胶，但是我不懂我那个老师直接让我用2的。。。
谢谢啦
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有点矛盾。有点纠结
26楼2014-04-11 17:20:44
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by sxxuan at 2014-04-11 11:36:18
不知道为何要送去韩国测序，只能呵呵了。真要测序的话如楼上一个虫友说的华大，invitrogen，金唯智等等公司都可以了，哪怕是做全基因组测序，多给点钱，没有攻不下来的...

真的？那你知道在欧洲这边测序很好的地方没？大概一个样多少钱。。。我人在欧洲
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有点矛盾。有点纠结
27楼2014-04-11 17:21:33
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by lsg-ll at 2014-04-11 15:46:23
胶回收 主要目的还是纯化...

我后来问了一个和我做的差不多一个老师 她说她直接送的PCR产物，让公司去纯化。。我觉得也是  太费劲了
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有点矛盾。有点纠结
28楼2014-04-11 17:22:26
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by jimewosen at 2014-04-11 16:34:14
切胶后浓度会更低
...

最后确定我好像不用切胶  直接送产物。。公司去纯化
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有点矛盾。有点纠结
29楼2014-04-11 17:23:09
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zhangtao110

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
21楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-11 02:22:57
我的他们说直接将产物送去公司测序...

哦，这个我还真没见过

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30楼2014-04-11 20:35:35
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