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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-11 21:28:59
送PCR产物测序可能存在产物的不专一性导致会有杂峰,另外,你的上一个帖子里面的PCR产物也不是很好,建议优化PCR条件,特别是你的电泳条件哦,你上一个帖子里面纯粹是电泳没泡好。
另外,你的测序的目的是什么呢?如果是为了验证你的一个系统对于某个基因的修饰或者剪切(例如cas9系统的敲出结果的话),可以胶回收直接送测PCR产物,我曾经做过,效果还可以;如果你的PCR产物是要做克隆的话,建议还是先把产物克隆到简单的载体中,挑取单克隆送测,这样的话能保证结果的均一性。
最后,国内的测序公司测得很好的,为啥要送到韩国测序,华大和invitrogen的测序不是很好的么,送到国外测序?为啥?
11楼2014-04-10 08:50:48
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-09 21:57:34
我P 25ul够不呀。。我今天听老板说要送到韩国去测序。。真是费劲呀...

至少50ul吧,送去韩国,可能他有别的用途吧,否则没必要
你的日子如何,你的力量也必如何!
12楼2014-04-10 09:05:17
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zhangtao110

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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为什么不用 eb染色呢?yk一般不是遗传转化后把菌拿去测序吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2014-04-10 09:26:44
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 08:50:48
送PCR产物测序可能存在产物的不专一性导致会有杂峰,另外,你的上一个帖子里面的PCR产物也不是很好,建议优化PCR条件,特别是你的电泳条件哦,你上一个帖子里面纯粹是电泳没泡好。
另外,你的测序的目的是什么呢? ...

我测序就是为了鉴别种类。。。
有点矛盾。有点纠结
14楼2014-04-10 14:47:53
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 08:50:48
送PCR产物测序可能存在产物的不专一性导致会有杂峰,另外,你的上一个帖子里面的PCR产物也不是很好,建议优化PCR条件,特别是你的电泳条件哦,你上一个帖子里面纯粹是电泳没泡好。
另外,你的测序的目的是什么呢? ...

我测序是为了鉴别mycorrhizal的种类,我现在在国外,不在国内的,呵呵 第一次做这个PCR,怎么看产物好不好呢?我现在什么都看不出来。。。一点儿基础都没有直接开始做,头疼呀
有点矛盾。有点纠结
15楼2014-04-10 14:50:33
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by sxxuan at 2014-04-10 09:05:17
至少50ul吧,送去韩国,可能他有别的用途吧,否则没必要...

我老板说韩国的好一些?我不懂呀。。。为什么不直接在欧盟做呢。。。
有点矛盾。有点纠结
16楼2014-04-10 14:51:07
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by zhangtao110 at 2014-04-10 09:26:44
为什么不用 eb染色呢?yk一般不是遗传转化后把菌拿去测序吗?

染色?没有染色。。我没有懂啊 什么意思
有点矛盾。有点纠结
17楼2014-04-10 14:51:47
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为嘛送韩国阿,莫非韩国测的好?华大干啥的,果断华大阿!

[ 发自小木虫客户端 ]
18楼2014-04-10 15:17:17
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石头雪儿

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-10 14:47:53
我测序就是为了鉴别种类。。。...

引物没问题的话,看看电泳缓冲液是不是该配新的了
19楼2014-04-10 15:55:35
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zhangtao110

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-10 14:51:47
染色?没有染色。。我没有懂啊 什么意思...

pcr产物一般不是用琼脂糖凝胶电泳跑一下么,在紫外光下观察产物大小,可以胶回收纯化一下,然后遗传转化,再测序么?

[ 发自小木虫客户端 ]
20楼2014-04-10 17:29:02
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