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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 已经快PCR折磨疯了。。救命呀
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-11 21:28:59
送PCR产物测序可能存在产物的不专一性导致会有杂峰，另外，你的上一个帖子里面的PCR产物也不是很好，建议优化PCR条件，特别是你的电泳条件哦，你上一个帖子里面纯粹是电泳没泡好。
另外，你的测序的目的是什么呢？如果是为了验证你的一个系统对于某个基因的修饰或者剪切（例如cas9系统的敲出结果的话），可以胶回收直接送测PCR产物，我曾经做过，效果还可以；如果你的PCR产物是要做克隆的话，建议还是先把产物克隆到简单的载体中，挑取单克隆送测，这样的话能保证结果的均一性。
最后，国内的测序公司测得很好的，为啥要送到韩国测序，华大和invitrogen的测序不是很好的么，送到国外测序？为啥？
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11楼2014-04-10 08:50:48
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-09 21:57:34
我P 25ul够不呀。。我今天听老板说要送到韩国去测序。。真是费劲呀...

至少50ul吧，送去韩国，可能他有别的用途吧，否则没必要
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你的日子如何，你的力量也必如何！
12楼2014-04-10 09:05:17
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zhangtao110

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么不用 eb染色呢？yk一般不是遗传转化后把菌拿去测序吗？

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13楼2014-04-10 09:26:44
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 08:50:48
送PCR产物测序可能存在产物的不专一性导致会有杂峰，另外，你的上一个帖子里面的PCR产物也不是很好，建议优化PCR条件，特别是你的电泳条件哦，你上一个帖子里面纯粹是电泳没泡好。
另外，你的测序的目的是什么呢？ ...

我测序就是为了鉴别种类。。。
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有点矛盾。有点纠结
14楼2014-04-10 14:47:53
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 08:50:48
送PCR产物测序可能存在产物的不专一性导致会有杂峰，另外，你的上一个帖子里面的PCR产物也不是很好，建议优化PCR条件，特别是你的电泳条件哦，你上一个帖子里面纯粹是电泳没泡好。
另外，你的测序的目的是什么呢？ ...

我测序是为了鉴别mycorrhizal的种类，我现在在国外，不在国内的，呵呵 第一次做这个PCR，怎么看产物好不好呢？我现在什么都看不出来。。。一点儿基础都没有直接开始做，头疼呀
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有点矛盾。有点纠结
15楼2014-04-10 14:50:33
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by sxxuan at 2014-04-10 09:05:17
至少50ul吧，送去韩国，可能他有别的用途吧，否则没必要...

我老板说韩国的好一些？我不懂呀。。。为什么不直接在欧盟做呢。。。
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有点矛盾。有点纠结
16楼2014-04-10 14:51:07
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhangtao110 at 2014-04-10 09:26:44
为什么不用 eb染色呢？yk一般不是遗传转化后把菌拿去测序吗？

染色？没有染色。。我没有懂啊 什么意思
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有点矛盾。有点纠结
17楼2014-04-10 14:51:47
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为嘛送韩国阿，莫非韩国测的好？华大干啥的，果断华大阿！

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18楼2014-04-10 15:17:17
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石头雪儿

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-10 14:47:53
我测序就是为了鉴别种类。。。...

引物没问题的话，看看电泳缓冲液是不是该配新的了
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19楼2014-04-10 15:55:35
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zhangtao110

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-10 14:51:47
染色？没有染色。。我没有懂啊 什么意思...

pcr产物一般不是用琼脂糖凝胶电泳跑一下么，在紫外光下观察产物大小，可以胶回收纯化一下，然后遗传转化，再测序么？

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20楼2014-04-10 17:29:02
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