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赵洪宇Clytie

新虫 (正式写手)

[求助] 细胞培养 已有4人参与

求问师兄师姐们一个非常基础但很困扰我的问题，为什么我在贴壁细胞传代时，经常出现胰酶消化后细胞很难吹落成单个状态，而是出现抱团的情况。我试着延长胰酶消化的时间，直到观察到细胞变为圆形并有成片脱落才终止消化，并加培养基进行吹打，但是仍然出现这种状况。我想问，是不是胰酶的问题还是操作的有问题？跪求大神指点
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命是弱者借口，运乃强者谦词
1楼 2014-04-07 14:06:42
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xingzk

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
赵洪宇Clytie: 金币+1, ★有帮助 2014-04-10 21:41:20
抱团的细胞，我是先用胰酶吹打一下，然后再加入培养基吹打。你可以试试。
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2楼2014-04-10 16:52:59
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赵洪宇Clytie

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xingzk at 2014-04-10 16:52:59
抱团的细胞，我是先用胰酶吹打一下，然后再加入培养基吹打。你可以试试。

哦这样，那你是用多少胰酶才能吹得起来呢？然后再加培养基终止消化？我用10cm的皿，一般都加1ml 0.25%胰酶消化。
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命是弱者借口，运乃强者谦词
3楼2014-04-10 21:32:48
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myyounger

至尊木虫 (文坛精英)
路过顺便顶一下 祝楼主一切顺利！
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4楼2014-04-11 08:37:14
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myyounger

至尊木虫 (文坛精英)
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5楼2014-04-11 08:38:11
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赵洪宇Clytie

新虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by myyounger at 2014-04-11 08:37:14
路过顺便顶一下 祝楼主一切顺利！

6楼2014-04-11 10:17:01
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飞鸟12-

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
赵洪宇Clytie: 金币+1, ★有帮助 2014-04-16 18:33:21
你的胰酶在配制的过程中加EDTA了么？是所有的细胞情况都一样呢，还是就个别的细胞株是这样的？因为有些细胞确实是容易抱团不好消化的
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7楼2014-04-16 10:05:23
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赵洪宇Clytie

新虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by 飞鸟12- at 2014-04-16 10:05:23
你的胰酶在配制的过程中加EDTA了么？是所有的细胞情况都一样呢，还是就个别的细胞株是这样的？因为有些细胞确实是容易抱团不好消化的

恩，加了的，胰酶都是中科院实验室订购配好后分发到细胞房冻存的。血管内皮细胞按理说不应该很容易抱团的，有时候可以吹成单个，有时候就很难，不知道具体是因为什么。
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命是弱者借口，运乃强者谦词
8楼2014-04-16 11:54:19
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飞鸟12-

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 赵洪宇Clytie at 2014-04-16 11:54:19
恩，加了的，胰酶都是中科院实验室订购配好后分发到细胞房冻存的。血管内皮细胞按理说不应该很容易抱团的，有时候可以吹成单个，有时候就很难，不知道具体是因为什么。...

这个我觉得应该是消化的问题，消化的时候除了消化的时间，胰酶的加入量，加培养基中和胰酶后的体积，吹打的次数都需要把握，消化时间一般我们也是控制在大片细胞开始脱落的时候加入含血清的培养基中和，胰酶的加入量一般控制在刚盖住细胞即可（因为我们通常不离心，直接中和吹打成单细胞悬液再传代就可以了，胰酶加入量多了可能会影响贴壁效果），加培养基中和我一般会选择2-4倍胰酶体积的含血清培养基，密度太大和太小都会影响吹打的效果，吹打的时候次数不宜太多，不宜吹出气泡。你们的胰酶在使用的过程中不是反复冻存的吧？
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9楼2014-04-16 13:33:16
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赵洪宇Clytie

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞鸟12- at 2014-04-16 13:33:16
这个我觉得应该是消化的问题，消化的时候除了消化的时间，胰酶的加入量，加培养基中和胰酶后的体积，吹打的次数都需要把握，消化时间一般我们也是控制在大片细胞开始脱落的时候加入含血清的培养基中和，胰酶的加入 ...

恩，我差不多也是这样做的，只是经常会吹出气泡。胰酶是解冻以后就放在四度保存的。无论如何非常谢谢你呀~
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命是弱者借口，运乃强者谦词
10楼2014-04-16 18:32:27
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