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guorongrong

铜虫 (正式写手)

[求助] 亚细胞定位 已有1人参与

最近想做某双子叶植物中两个基因的亚细胞定位，用软件预测一个是定位在细胞质膜上，另一个定位在细胞外，请问可以用融合GFP的方法进行亚细胞定位分析吗？如果可以的话，是转化拟南芥原生质体还是洋葱表皮？请各位前辈指点一下。谢谢
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1楼 2014-04-05 20:10:47
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Atalpha

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
guorongrong: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-07 22:26:47
定位在膜上的蛋白，其GFP要融合到该蛋白的胞内区段，且不影响功能为好，对于分泌型蛋白，似乎GFP检测不很成功，，因为胞外pH低，GFP经常不亮。

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guorongrong
2楼2014-04-06 00:40:02
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guorongrong

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Atalpha at 2014-04-06 00:40:02
定位在膜上的蛋白，其GFP要融合到该蛋白的胞内区段，且不影响功能为好，对于分泌型蛋白，似乎GFP检测不很成功，，因为胞外pH低，GFP经常不亮。

做亚细胞定位的时候，不是必须要构建融合表达载体吗？请问要怎么把GFP融合到该蛋白的胞内区段？因为不知道该蛋白的胞内区段是在哪一段？
那胞外蛋白是不是没必要做亚细胞定位？之前没做过这部分的实验，所以大多都不懂，还请您多多指教。谢谢您的指导。
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3楼2014-04-07 22:29:33
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guorongrong

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Atalpha at 2014-04-06 00:40:02
定位在膜上的蛋白，其GFP要融合到该蛋白的胞内区段，且不影响功能为好，对于分泌型蛋白，似乎GFP检测不很成功，，因为胞外pH低，GFP经常不亮。

你好，还请您多多指教一下。我看到论文里面是用FM4-64这个染料来染细胞膜，但是这个染料还挺贵的，有没有其他方法可以做亚细胞定位？
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4楼2014-04-19 13:13:52
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