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guorongrong

铜虫 (正式写手)

[求助] 亚细胞定位已有1人参与

最近想做某双子叶植物中两个基因的亚细胞定位,用软件预测一个是定位在细胞质膜上,另一个定位在细胞外,请问可以用融合GFP的方法进行亚细胞定位分析吗?如果可以的话,是转化拟南芥原生质体还是洋葱表皮?请各位前辈指点一下。谢谢
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Atalpha

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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guorongrong: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-07 22:26:47
定位在膜上的蛋白,其GFP要融合到该蛋白的胞内区段,且不影响功能为好,对于分泌型蛋白,似乎GFP检测不很成功,,因为胞外pH低,GFP经常不亮。

[ 发自小木虫客户端 ]

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2楼2014-04-06 00:40:02
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guorongrong

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Atalpha at 2014-04-06 00:40:02
定位在膜上的蛋白,其GFP要融合到该蛋白的胞内区段,且不影响功能为好,对于分泌型蛋白,似乎GFP检测不很成功,,因为胞外pH低,GFP经常不亮。

做亚细胞定位的时候,不是必须要构建融合表达载体吗?请问要怎么把GFP融合到该蛋白的胞内区段?因为不知道该蛋白的胞内区段是在哪一段?
那胞外蛋白是不是没必要做亚细胞定位?之前没做过这部分的实验,所以大多都不懂,还请您多多指教。谢谢您的指导。
3楼2014-04-07 22:29:33
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guorongrong

铜虫 (正式写手)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by Atalpha at 2014-04-06 00:40:02
定位在膜上的蛋白,其GFP要融合到该蛋白的胞内区段,且不影响功能为好,对于分泌型蛋白,似乎GFP检测不很成功,,因为胞外pH低,GFP经常不亮。

你好,还请您多多指教一下。我看到论文里面是用FM4-64这个染料来染细胞膜,但是这个染料还挺贵的,有没有其他方法可以做亚细胞定位?
4楼2014-04-19 13:13:52
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