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樊樊

铜虫 (小有名气)

[求助] 各位大神,求助:PCR产物纯化后没有条带了…… 已有3人参与

目的DNApcr扩增出来条带在1500bp左右,条带明亮单一,符合我的实验要求。p了50微升体系,把产物用全式金纯化试剂盒纯化之后就没有条带了,这是怎么回事啊?第一次失败怀疑是体系浓度太小,所以第二次p了两管平行,同时p的,条带都很正常,纯化依旧没有条带,这是为什么。
各位大神帮帮我。
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-05 12:32:32
1 是说往柱子里面加样的时候,要悬空滴在柱子中间?   这个确实没有注意到……  汗一个
2 上样量大概多少合适?我只上了三微升,是不是太少了?3微升是因为p好的产物孔里只加这么少...

上样量在20uL左右吧,一般点完就剩很少了的,而且一般回收之后都不用检测,检测的话只是自己不相信自己
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
12楼2014-04-05 15:28:57
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探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-05 11:04:57
樊樊: 金币+3, 有帮助 2014-04-05 12:34:08
应该是浓度低  你可以浓缩下  或者下次洗的时候少加点水  洗
相信什么才会得到什么
2楼2014-04-05 10:43:30
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-05 11:05:02
樊樊: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-05 12:34:30
1、可能你过柱子的时候没把水加到正中间
2、你检测时的上样量太小,本来回收后浓度就很低的
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
3楼2014-04-05 10:57:03
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-05 14:44:04
从两个方面考虑吧:
1. 挂柱没挂上。
2. 洗脱没洗下。
洗脱的话看看洗脱液的PH值是否正确,看看说明书。
实在不行自己配置试剂来纯化把,3M CH3COONa,你在网上搜搜方法。
4楼2014-04-05 11:16:12
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