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鬼羽帝魂木虫 (著名写手)
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[求助]
求助：酶切的疑惑 已有3人参与
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最近做酶切，老是切不好，求帮助。 （1）回收不到东西：图1是回收之前的带。图2是回收之后的带，已经弥散。 （2）做转化鉴定，发现原来质粒未酶切完全。但是回收后的条带有稍微的弥散，这是什么原因？如图3. （3）图4中圆圈指示的区域是什么？是弥散的还是。。。。？？ 望解答。急求。  图1  图2  图3  图4 |
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【答案】应助回帖
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鬼羽帝魂: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-04-10 10:48:41
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:46:48
鬼羽帝魂: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-04-10 10:48:41
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:46:48
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回收需要注意的一些问题： 1.如果你已经看到目标条带，那么切胶时，要尽量保证把条带切下，而不切下太多的胶， 当然也不能把条带切坏（不过我一直困惑，如果我把条带切碎了到底能不能回收回来，未解啊！） 2.回收时，最好不要加过多的溶胶液，标准方法是说要称量再计算什么的，如果胶块不是很大很多， 一般加500-600ul应该可以的 3.回收过程中涉及的用酒精洗脱，烘干，是否做好了? 4.另外，我最近才知道，忘了是在什么地方看到的，说即使回收后电泳，看不到条带，也是可以继续连接的，当时我就惊呆了，于是我试了一下啊，果然连上了，不过我觉得还是看到条带才放心。 5.至于其他的问题，不太好解释，能力有限 |
12楼2014-04-09 21:29:13
d00614028
银虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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鬼羽帝魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-05 10:20:12
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-05 10:57:51
鬼羽帝魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-08 21:45:41
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鬼羽帝魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-05 10:20:12
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-05 10:57:51
鬼羽帝魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-08 21:45:41
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1. 回收不到东西： 看看你的TAE的pH值是否正确，我们实验室曾经有一次TAE 的PH值不正确导致回收不了DNA。另外你胶回收的洗脱液用的是什么，是水么？洗脱液的PH好像要在8左右，保持碱性，要不然洗脱不下来。 2. 未酶切完全，回收回来的可能就有质粒，你那弥散可能就是质粒。 3. 你圈的东西是不是因为跑胶的问题导致的呢，看你胶配的不是很好，另外，给个建议，不要用这么大的孔来跑，我觉得这样会导致弥散严重，建议用正常的胶回收孔来跑（个人建议）。 希望对你有帮助。 |
2楼2014-04-05 10:01:41
鬼羽帝魂
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3楼2014-04-05 10:19:57
d00614028
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4楼2014-04-05 10:56:31
10