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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 拓扑异构酶作用的超螺旋DNA
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暖心89

铜虫 (小有名气)

[求助] 拓扑异构酶作用的超螺旋DNA已有1人参与

为什么现在查不到超螺旋pBR322DNA的厂家了？作为拓扑异构酶的底物进行琼脂糖凝胶电泳的话，可以用哪种DNA代替？
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佐助思密达。
1楼2014-04-04 17:22:19
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
暖心89(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-05 15:46:03
暖心89: 金币+19, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-04-05 19:44:13
promega 公司产品编号是D1511,479元，http://www.promega.com.cn/Produc ... amp;PostType=Detail 。不确定超螺旋的比例。用量大的话，可以咨询一些代制备质粒的公司看看会不会便宜一些。
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为什么
2楼2014-04-04 18:43:13
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暖心89

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2014-04-04 18:43:13
promega 公司产品编号是D1511,479元，http://www.promega.com.cn/Product.asp?Pro_ID=1271&PostType=Detail 。不确定超螺旋的比例。用量大的话，可以咨询一些代制备质粒的公司看看会不会便宜一些。

请问您说的这个是pBR322 vector，是带有pBR322DNA的质粒，我需要用pBR322DNA,做DNA松弛实验，是不是得从中提取出来啊？
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佐助思密达。
3楼2014-04-06 19:13:00
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547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暖心89 at 2014-04-06 19:13:00
请问您说的这个是pBR322 vector，是带有pBR322DNA的质粒，我需要用pBR322DNA,做DNA松弛实验，是不是得从中提取出来啊？...

pBR322是一种质粒(plasmid)，本身就是经典的克隆载体（vector)，整个质粒pBR322 DNA。但现在这个质粒实际在分子克隆中不常使用了。如果10ug够用，可以不做转化大肠杆菌和质粒提取，不够用就提取一些。你要做DNA松弛实验，可以考虑其他容易获得的质粒超螺旋DNA，可以买个试剂盒回来提取一些，保证够用又省钱，有熟悉质粒提取的同学带着做提取就更好。严谨一点的话，找有超速离心机的实验室做一下超螺旋质粒DNA的分离，次一点的就用好点的试剂盒多提取几次，争取得一些超螺旋含量高的样品。
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为什么
4楼2014-04-06 23:17:53
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暖心89

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2014-04-06 23:17:53
pBR322是一种质粒(plasmid)，本身就是经典的克隆载体（vector)，整个质粒pBR322 DNA。但现在这个质粒实际在分子克隆中不常使用了。如果10ug够用，可以不做转化大肠杆菌和质粒提取，不够用就提取一些。你要做DNA松弛 ...

通过转化大肠杆菌和质粒提取的目的是扩增DNA吗？您的意思是，如果PBR322质粒够用的话就不用扩增、可以直接用来做DNA松弛实验？因为pBR322质粒比较贵，我们实验室不是专门做生物的，所以提取质粒不太可能，那么如果用小牛胸腺DNA可以吗？在线等，很着急，麻烦您啦。。
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佐助思密达。
5楼2014-04-07 09:30:44
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547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 暖心89 at 2014-04-07 09:30:44
通过转化大肠杆菌和质粒提取的目的是扩增DNA吗？您的意思是，如果PBR322质粒够用的话就不用扩增、可以直接用来做DNA松弛实验？因为pBR322质粒比较贵，我们实验室不是专门做生物的，所以提取质粒不太可能，那么如果 ...

够用就直接做了。不清楚小牛胸腺DNA用于你的实验是否合适。上海捷瑞的DNA便宜一些，http://www.generay.com.cn/cpxx/list_27.aspx?lcid=20，很多公司提供质粒DNA制备服务，比如 http://www.genewiz.com.cn/public/plasmidprep.aspx，建议你咨询一下本地的经销商，或者找找本地的研究单位提供一点。如果实验条件具备，自己提取也是很简单的。
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为什么
6楼2014-04-07 15:33:14
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