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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教！熟悉“考马斯亮蓝测定蛋白质浓度”的虫子请进
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gaona306

铜虫 (正式写手)

[交流] 请教！熟悉“考马斯亮蓝测定蛋白质浓度”的虫子请进

大家好，请教各位虫子一个问题：
　　文献报道，考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
　　但我按照文献配制的G－250（0.1mg/mL）是紫色的，用紫外光谱检测时超出量程，所以用二次水稀释一倍，检测其最大吸光度值，不在488nm，将其和一定浓度的牛血清白蛋白结合，发现其颜色并未变成青色，吸光度也不在595nm，而是随着蛋白浓度的增加红移。实验现象与文献完全不同，不知道是哪里出错了，请教各位！
　　很着急，请知情人解答疑惑，万分感谢！
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1楼 2008-02-28 19:30:05
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
asr(金币+1,VIP+0)::P 多谢。
考马斯亮蓝G-250最大吸收波长465nm，跟蛋白结合后595nm。
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2楼2008-02-28 20:28:32
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zhjcao

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
asr(金币+2,VIP+0)::P 多谢，欢迎常来交流！
gaona306(金币+1,VIP+0):谢谢！
你的方法是怎么样的?
我找到一个标准方法:
取含10-100ug蛋白质溶液于小试管中,用双蒸水调体积到0.1mL,然后加入5mL蛋白试剂,充分振荡混合,2分钟后于595nm测定光吸收值.以双蒸水及5mL蛋白试剂用为空白对照。
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3楼2008-02-28 20:33:47
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gaona306

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhjcao at 2008-2-28 20:33:
你的方法是怎么样的?
我找到一个标准方法:
取含10-100ug蛋白质溶液于小试管中,用双蒸水调体积到0.1mL,然后加入5mL蛋白试剂,充分振荡混合,2分钟后于595nm测定光吸收值.以双蒸水及5mL蛋白试剂用为空白对照。

我就是按照上述方法做的，考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是个很经典的方法，已经写进大学实验课了，我觉得我的操作没有问题，可实验现象和标准方法差别很大，主要是加入蛋白质前后颜色均与文献不符，G－250与蛋白质结合之后的最大吸光度值也不在595nm,想不明白到底是哪里出问题了？
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4楼2008-02-29 09:08:35
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zhjcao

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie, . 期待更多精彩
gaona306(金币+1,VIP+0):谢谢啊，我错把R－250当成G－250了，呵呵
只能说试剂有问题了,双蒸水pH测了吗
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5楼2008-02-29 09:13:02
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie, . 期待更多精彩
gaona306(金币+1,VIP+0):谢谢！
G-250染液不是紫色的，而是那种较浅的棕红色，与蛋白结合后呈蓝色。你确定你的试剂是G-250吗？G-250染液的配方：G-250100mg，85%磷酸120ml，95%乙醇50ml定容至1L，滤纸过滤！！
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6楼2008-02-29 09:59:09
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gaona306

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by puma2003 at 2008-2-29 09:59:
G-250染液不是紫色的，而是那种较浅的棕红色，与蛋白结合后呈蓝色。你确定你的试剂是G-250吗？G-250染液的配方：G-250100mg，85%磷酸120ml，95%乙醇50ml定容至1L，滤纸过滤！！

我仔细看了一下药品标签，我用的考马斯亮蓝是R－250，不是G-250，但同样都是考马斯亮蓝，不知道是不是这个的原因？R-250和R-250到底有什么区别呢？
还有就是我配制的考马斯亮蓝溶液放置几天之后，与蛋白质混合，就沉淀了，不知道是怎么回事？
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7楼2008-03-01 13:44:51
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afaf66

至尊木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
gaona306(金币+1,VIP+0):俺们没有相应的仪器，只能用老办法，谢谢提醒！
G-250和R-250的取代基有所不同,造成了颜色的不同,测蛋白含量一定不要用错
要是有酶标仪的话,你可以买试剂盒,成本比这么做低
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8楼2008-03-01 17:08:11
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
gaona306(金币+1,VIP+0):谢谢提醒！
488nm不是紫外线，560nm就已经是红光了
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9楼2008-03-02 10:52:47
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by gaona306 at 2008-3-1 13:44:


我仔细看了一下药品标签，我用的考马斯亮蓝是R－250，不是G-250，但同样都是考马斯亮蓝，不知道是不是这个的原因？R-250和R-250到底有什么区别呢？
还有就是我配制的考马斯亮蓝溶液放置几天之后，与蛋白质混 ...

R-250染胶使用，G-250也可染胶但是R-250不能用于蛋白浓度测定。出现沉淀应该是蛋白浓度过高所致
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10楼2008-03-03 08:40:44
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