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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gaona306

铜虫 (正式写手)

[交流] 请教!熟悉“考马斯亮蓝测定蛋白质浓度”的虫子请进

大家好,请教各位虫子一个问题:
  文献报道,考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
  但我按照文献配制的G-250(0.1mg/mL)是紫色的,用紫外光谱检测时超出量程,所以用二次水稀释一倍,检测其最大吸光度值,不在488nm,将其和一定浓度的牛血清白蛋白结合,发现其颜色并未变成青色,吸光度也不在595nm,而是随着蛋白浓度的增加红移。实验现象与文献完全不同,不知道是哪里出错了,请教各位!
  很着急,请知情人解答疑惑,万分感谢!
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zhjcao

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
asr(金币+2,VIP+0)::P 多谢,欢迎常来交流!
gaona306(金币+1,VIP+0):谢谢!
你的方法是怎么样的?
我找到一个标准方法:
取含10-100ug蛋白质溶液于小试管中,用双蒸水调体积到0.1mL,然后加入5mL蛋白试剂,充分振荡混合,2分钟后于595nm测定光吸收值.以双蒸水及5mL蛋白试剂用为空白对照。
3楼2008-02-28 20:33:47
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


asr(金币+1,VIP+0)::P 多谢。
考马斯亮蓝G-250最大吸收波长465nm,跟蛋白结合后595nm。
2楼2008-02-28 20:28:32
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gaona306

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zhjcao at 2008-2-28 20:33:
你的方法是怎么样的?
我找到一个标准方法:
取含10-100ug蛋白质溶液于小试管中,用双蒸水调体积到0.1mL,然后加入5mL蛋白试剂,充分振荡混合,2分钟后于595nm测定光吸收值.以双蒸水及5mL蛋白试剂用为空白对照。

我就是按照上述方法做的,考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是个很经典的方法,已经写进大学实验课了,我觉得我的操作没有问题,可实验现象和标准方法差别很大,主要是加入蛋白质前后颜色均与文献不符,G-250与蛋白质结合之后的最大吸光度值也不在595nm,想不明白到底是哪里出问题了?
4楼2008-02-29 09:08:35
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zhjcao

木虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie, . 期待更多精彩
gaona306(金币+1,VIP+0):谢谢啊,我错把R-250当成G-250了,呵呵
只能说试剂有问题了,双蒸水pH测了吗
5楼2008-02-29 09:13:02
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