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0209cy

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增图片求助

提取的是昆虫总RNA,提取的质量可能不是很好吧,反转录成cDNA后做为模板,
PCR程序为:94℃ 3min,一个循环
                   94℃ 30s  50℃ 45s  72℃ 1min 35个循环
                  72℃   10min  一个循环

电泳结果怎么老是出现弥散的带啊???大小在800bp左右,到底是什么原因,请各位大虾指教啊 !!谢谢哦
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie, . 期待更多精彩
提高一下退火温度试试50℃有点低,一般选择范围是Tm正负5℃,最好比Tm低3℃。当然只是经验,具体引物还是具体分析。
细推物理须行乐。
8楼2008-03-02 12:22:31
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

可能反应体系的试剂不好
2楼2008-03-02 11:11:44
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annwt

木虫 (正式写手)

引物的退火温度是多少,怎么计算的?
3楼2008-03-02 11:13:53
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lovebaby

铜虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie,
是不是引物的特异性不好?跑变性胶试试,可能是会分离出很多带
4楼2008-03-02 11:43:04
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