应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩增图片求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 998  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

0209cy

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增图片求助

提取的是昆虫总RNA，提取的质量可能不是很好吧，反转录成cDNA后做为模板，
PCR程序为：94℃ 3min，一个循环
                   94℃ 30s  50℃ 45s  72℃ 1min 35个循环
                  72℃   10min  一个循环

电泳结果怎么老是出现弥散的带啊？？？大小在800bp左右，到底是什么原因，请各位大虾指教啊 ！！谢谢哦
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-02-28 17:59:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
可能反应体系的试剂不好
赞一下 回复此楼
2楼2008-03-02 11:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)
引物的退火温度是多少，怎么计算的？
赞一下 回复此楼
3楼2008-03-02 11:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovebaby

铜虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie,
是不是引物的特异性不好?跑变性胶试试,可能是会分离出很多带
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-03-02 11:43:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0209cy

铜虫 (小有名气)

回复

引用回帖:
Originally posted by annwt at 2008-3-2 11:13:
引物的退火温度是多少，怎么计算的？

引物的退火温度是50度，但引物合成单两条引物都是60多度的退火温度，50度是我自己试试看设定的。
赞一下 回复此楼
5楼2008-03-02 12:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0209cy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lovebaby at 2008-3-2 11:43:
是不是引物的特异性不好?跑变性胶试试,可能是会分离出很多带

我设计的是兼并引物，特意性会不好吗？什么是变性胶啊？我是初学什么都不懂啊！！！
赞一下 回复此楼
6楼2008-03-02 12:15:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0209cy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jurkat.1640 at 2008-3-2 11:11:
可能反应体系的试剂不好

我同学也是用的这些试剂，他的没有问题啊
赞一下 回复此楼
7楼2008-03-02 12:16:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie, . 期待更多精彩
提高一下退火温度试试50℃有点低，一般选择范围是Tm正负5℃，最好比Tm低3℃。当然只是经验，具体引物还是具体分析。
赞一下(10人) 回复此楼
细推物理须行乐。
8楼2008-03-02 12:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dreamsail

银虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.
撇开PCR的问题不说的话,也许有可能有电泳的问题,一般电压不超过5V/cm,但是也不要太小,不然会扩散得厉害.

多试几次吧~记得去年我自己试一两个月,天天跑.
好运!
赞一下(10人) 回复此楼
9楼2008-03-03 01:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)
可能引物的问题吧,增加引物浓度看.
赞一下 回复此楼
10楼2008-03-03 17:12:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 0209cy 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 287求调剂 +14 land xuxu 2026-03-26 14/700 2026-03-30 18:38 by 544594351
[考研] 一志愿南开大学0710生物学359求调剂 +5 兔兔兔111223314 2026-03-29 7/350 2026-03-30 18:29 by 兔兔兔111223314
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 286求调剂 +5 Faune 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:15 by 无际的草原
[考研] 309求调剂 +13 谁不是少年 2026-03-29 13/650 2026-03-30 16:16 by 晶体之美
[考研] 070300化学354求调剂 +7 101次希望 2026-03-28 7/350 2026-03-30 13:22 by Iveryant
[考研] 材料与化工272求调剂 +21 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 21/1050 2026-03-30 10:52 by 晴空210210
[考研] 296求调剂 +10 彼岸t 2026-03-29 10/500 2026-03-30 10:50 by 探123
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +4 邱gl 2026-03-26 7/350 2026-03-30 08:39 by 探123
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[考研] 调剂考研 +3 王杰一 2026-03-29 3/150 2026-03-29 08:09 by fmesaito
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +12 路痴小琪 2026-03-27 12/600 2026-03-28 15:41 by L135790
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭