应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩增图片求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 981  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

0209cy

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增图片求助

提取的是昆虫总RNA，提取的质量可能不是很好吧，反转录成cDNA后做为模板，
PCR程序为：94℃ 3min，一个循环
                   94℃ 30s  50℃ 45s  72℃ 1min 35个循环
                  72℃   10min  一个循环

电泳结果怎么老是出现弥散的带啊？？？大小在800bp左右，到底是什么原因，请各位大虾指教啊 ！！谢谢哦
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-02-28 17:59:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
可能反应体系的试剂不好
赞一下 回复此楼
2楼2008-03-02 11:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)
引物的退火温度是多少，怎么计算的？
赞一下 回复此楼
3楼2008-03-02 11:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovebaby

铜虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie,
是不是引物的特异性不好?跑变性胶试试,可能是会分离出很多带
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-03-02 11:43:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0209cy

铜虫 (小有名气)

回复

引用回帖:
Originally posted by annwt at 2008-3-2 11:13:
引物的退火温度是多少，怎么计算的？

引物的退火温度是50度，但引物合成单两条引物都是60多度的退火温度，50度是我自己试试看设定的。
赞一下 回复此楼
5楼2008-03-02 12:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0209cy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lovebaby at 2008-3-2 11:43:
是不是引物的特异性不好?跑变性胶试试,可能是会分离出很多带

我设计的是兼并引物，特意性会不好吗？什么是变性胶啊？我是初学什么都不懂啊！！！
赞一下 回复此楼
6楼2008-03-02 12:15:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0209cy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jurkat.1640 at 2008-3-2 11:11:
可能反应体系的试剂不好

我同学也是用的这些试剂，他的没有问题啊
赞一下 回复此楼
7楼2008-03-02 12:16:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie, . 期待更多精彩
提高一下退火温度试试50℃有点低，一般选择范围是Tm正负5℃，最好比Tm低3℃。当然只是经验，具体引物还是具体分析。
赞一下(10人) 回复此楼
细推物理须行乐。
8楼2008-03-02 12:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dreamsail

银虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.
撇开PCR的问题不说的话,也许有可能有电泳的问题,一般电压不超过5V/cm,但是也不要太小,不然会扩散得厉害.

多试几次吧~记得去年我自己试一两个月,天天跑.
好运!
赞一下(10人) 回复此楼
9楼2008-03-03 01:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)
可能引物的问题吧,增加引物浓度看.
赞一下 回复此楼
10楼2008-03-03 17:12:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 0209cy 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 QiMing7 2026-03-25 5/250 2026-03-29 21:10 by 唐沐儿
[考研] 337求调剂 +4 《树》 2026-03-29 4/200 2026-03-29 20:52 by 唐沐儿
[考研] 289求调剂 +5 BrightLL 2026-03-29 5/250 2026-03-29 17:24 by zhyzzh
[考研] 277跪求调剂 +6 1915668 2026-03-27 10/500 2026-03-29 16:03 by 王亮_大连医科大
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 海纳百川Ly 2026-03-29 5/250 2026-03-29 09:57 by Sjndkwm
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求调剂 +5 0857求调剂. 2026-03-24 6/300 2026-03-28 22:04 by zhq0425
[考研] 071000生物学求调剂，初试成绩343 +7 小小甜面团 2026-03-25 7/350 2026-03-28 20:25 by 唐沐儿
[考研] 复试调剂 +3 raojunqi0129 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:27 by 落睿可思
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 材料求调剂一志愿哈工大324 +7 闫旭东 2026-03-28 9/450 2026-03-28 08:51 by Xu de nuo
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +4 手机用户 2026-03-26 4/200 2026-03-28 07:17 by mmm just
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭