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请问WB做成这样，说明人品已经极差了吗？ 已有1人参与
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各位大虫，中午好！ 我做WB，上了5个泳道，实验结果如图，是内参蛋白H3（histone H3，14kDa）和目的蛋白(是两个条带，42kDa和38kDa),蓝色为marker（第一个图是内参的，第二个图是目的蛋白的）。我跑胶了以后没有考染，直接做WB，做出来这样的结果。解释不了为什么会是这样的结果？marker是好的，说明不是胶的问题。蛋白上样量150微克（上样量不能再少了，再少的话我的目的条带就不清晰了）。而我的目的蛋白WB以后出来还算勉强，但有点模糊和拖尾。所以我觉得极可能是蛋白的问题。 因为我不想上样体积太大，总体积约为20微升，所以我打算是10微的蛋白溶液和10微的2×SDS loading buffer，但是最后蛋白上样量保证150微克的条件下，蛋白上样体积就会超过10微甚至达到16微，然后剩余的体积我就把加2×SDS buffer补足20微，这会导致上样前煮沸的过程中蛋白没有溶解好或没有完全溶解吗，会造成这样的结果吗？ 提取的植物总蛋白，然后用很剧烈的方式振荡溶解的，这样会对蛋白有什么影响吗？ 感谢有经验的大虫，解答问题，如果还有可能其他的原因导致这样的结果，请提供您的宝贵建议或意见，谢谢！   内参蛋白H3.jpg  目的蛋白.jpg |
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4楼2014-04-24 21:07:42
d00614028
银虫 (小有名气)
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