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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 关于原核表达载体构建，跪求~~~~
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lihuahan

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-30 10:51:37
你不是已经知道CDS了么？CDS就是你的ORF
我估计你就是在考虑顺框的问题，要是你用的酶切位点不顺框，添加几个碱基让它顺了就行了
纯化蛋白选载体，讲究多了去了。。。
要用什么tag？在哪个宿主表达？用什么表达 ...

查的资料说CDS序列不是ORF呀……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2014-05-01 11:08:02
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biology-boy
12楼2014-05-06 16:41:15
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zb61788260

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-01 22:51:47
懂你的意思了。。。。
你所谓的pMD应该是个T/A克隆载体吧？
我一般不这样干，多出一轮克隆，浪费时间
但是遇见很难克隆的片段，比如怎么也拿不到太多的情况下
先T/A克隆获得片段是上策

但是即便是这样，跟酶 ...

大神你好，我有个问题想咨询一下。我想将核桃中的一种蛋白构建载体进行原核表达，但是这种蛋白的氨基酸序列直接在NCBI中找到显示的是2S albumin seed storage protein precursor mRNA, partial cds，它是之前某个学者在发表的一篇文献中鉴定出来的，但是显示的是“ precursor mRNA, partial cds”，我想问我可以直接拿这段核苷酸序列来对其构建载体进行蛋白表达吗？表达出的蛋白能够跟天然的蛋白序列保持一致吗？还是需要我自己构建它的cDNA文库然后筛选出序列呢？希望您能解惑！感激不尽...
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13楼2014-11-27 15:36:02
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