| 查看: 1804 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
厚德求是木虫 (著名写手)
|
[求助]
用试剂盒通过全质粒PCR来做定点突变，导入不了感受态细胞，请帮我走出困境！ 已有5人参与
|
||
|
先介绍一下我的试验情况： 就像题目所说，我的试验是对蛋白质做定点突变，方法是设计突变引物，用全质粒作为模板，在突变结束完成后用选择性消化甲基化核酸的酶处理产物，然后利用热击法把核酸片段转化导入感受态细胞中。 现在的问题是，全质粒PCR是挺成功的，模板条带大小正确，明亮清晰。可是用试剂盒提供的感受态细胞做转化，就长不出单菌落，而是一大片薄薄的云雾一样的东西，师兄说不对劲，可能失败了。可是我已经重复了3次了，每次都是这种类似的情况！所以我想，是不是他的感受态有问题，现在想自己制备DH5α感受态细胞，把目标质粒导入这个感受态细胞，在它里面完成超螺旋的装备，然后再导入我的目标宿主中。 对了，我用的试剂盒是“TransGen”（貌似是北京的公司）的fast mutagenesis system，有没有用过的朋友啊？我觉得这个很不好用啊！是不是要换试剂盒啊？请了解情况和有过类似经历的朋友帮我！先谢谢了！  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有250人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
厚德求是
木虫 (著名写手)
- 应助: 41 (小学生)
- 金币: 2270.6
- 散金: 1050
- 红花: 3
- 帖子: 1208
- 在线: 107.8小时
- 虫号: 2418606
- 注册: 2013-04-15
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2015-10-19 00:50:57
biostar2009
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +220 - MolEPI: 20
- 应助: 231 (大学生)
- 金币: 10391.9
- 散金: 387
- 红花: 63
- 帖子: 540
- 在线: 151.9小时
- 虫号: 2811882
- 注册: 2013-11-19
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
2楼2014-03-31 20:43:45
厚德求是
木虫 (著名写手)
- 应助: 41 (小学生)
- 金币: 2270.6
- 散金: 1050
- 红花: 3
- 帖子: 1208
- 在线: 107.8小时
- 虫号: 2418606
- 注册: 2013-04-15
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2014-03-31 20:52:49
biostar2009
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +220 - MolEPI: 20
- 应助: 231 (大学生)
- 金币: 10391.9
- 散金: 387
- 红花: 63
- 帖子: 540
- 在线: 151.9小时
- 虫号: 2811882
- 注册: 2013-11-19
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
4楼2014-03-31 20:58:20
10