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厚德求是木虫 (著名写手)
Ph. D. Prof.
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[求助]
用试剂盒通过全质粒PCR来做定点突变，导入不了感受态细胞，请帮我走出困境！ 已有5人参与
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先介绍一下我的试验情况： 就像题目所说，我的试验是对蛋白质做定点突变，方法是设计突变引物，用全质粒作为模板，在突变结束完成后用选择性消化甲基化核酸的酶处理产物，然后利用热击法把核酸片段转化导入感受态细胞中。 现在的问题是，全质粒PCR是挺成功的，模板条带大小正确，明亮清晰。可是用试剂盒提供的感受态细胞做转化，就长不出单菌落，而是一大片薄薄的云雾一样的东西，师兄说不对劲，可能失败了。可是我已经重复了3次了，每次都是这种类似的情况！所以我想，是不是他的感受态有问题，现在想自己制备DH5α感受态细胞，把目标质粒导入这个感受态细胞，在它里面完成超螺旋的装备，然后再导入我的目标宿主中。 对了，我用的试剂盒是“TransGen”（貌似是北京的公司）的fast mutagenesis system，有没有用过的朋友啊？我觉得这个很不好用啊！是不是要换试剂盒啊？请了解情况和有过类似经历的朋友帮我！先谢谢了！  |
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4楼2014-03-31 20:58:20
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