24小时热门版块排行榜    

查看: 923  |  回复: 10
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)

[交流] 添加酶切位点的引物设计问题

如题,要设计这样的引物是应该先设计出找出理想的引物,然后再添加酶切位点和保护碱基,然后PCR条件应该是按添加之前的软件给出的条件吗??还是应该在添加酶切位点后推算它的条件??语言表达有点混乱我自己。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Kiddy

金虫 (小有名气)

我设计这类引物的时候是先设计“比较理想的引物”(采用楼主的话说),然后分析目的基因里是否存在我需要的酶切位点,然后在引物的5‘端添加上酶切位点和保护碱基,在做PCR的时候,退火温度是采用没加酶切位点时引物的退火温度,不过本人是采用的TOUCHDOWN,这样容易出结果一些,楼主都可以试一试,祝好运!
11楼2008-03-06 09:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

guohuayin

木虫 (著名写手)

博士,副教授


reasonspare(金币+1,VIP+0):THX, BAN BAN
在设计PCR反应条件时,不要考虑所添加酶切位点和保护碱基,你可以先用小体系扩增摸索好条件后,再正式扩增。
内生菌资源和核酸分子的利用
2楼2008-02-26 06:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)

楼上的还是没有明白我的意思....苦恼
3楼2008-02-26 08:34:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mascotte

金虫 (正式写手)

退火温度按添加之前的算。而且温度低于理论温度比较容易批
4楼2008-02-26 08:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见