应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 添加酶切位点的引物设计问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 940  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yuyixst

木虫 (正式写手)

[交流] 添加酶切位点的引物设计问题

如题，要设计这样的引物是应该先设计出找出理想的引物，然后再添加酶切位点和保护碱基，然后PCR条件应该是按添加之前的软件给出的条件吗？？还是应该在添加酶切位点后推算它的条件？？语言表达有点混乱我自己。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-02-25 18:51:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guohuayin

木虫 (著名写手)

博士，副教授
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):THX, BAN BAN
在设计PCR反应条件时，不要考虑所添加酶切位点和保护碱基，你可以先用小体系扩增摸索好条件后，再正式扩增。
赞一下(10人) 回复此楼
内生菌资源和核酸分子的利用
2楼2008-02-26 06:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
楼上的还是没有明白我的意思....苦恼
赞一下 回复此楼
3楼2008-02-26 08:34:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mascotte

金虫 (正式写手)
退火温度按添加之前的算。而且温度低于理论温度比较容易批
赞一下 回复此楼
4楼2008-02-26 08:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhjcao

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+0,VIP+0):THX
reasonspare(金币+2,VIP+0):THX
你要要扩增一个完整基因吗?
如果是的话就要在起始密码子前加几个碱基（也就是内切酶识别的序列），但有一点要注意，你加的酶切位点序列，基因内部不能有的。同时有些酶还要在5`端多几个多余的碱基，切割效率才会高的。
赞一下(20人) 回复此楼
5楼2008-02-26 09:00:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangjun0457

银虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):THX
我觉得关键在于模板。如果模板是质粒，那怎么干都行。如果是来自基因组DNA，那就可能麻烦一些。
赞一下(10人) 回复此楼
6楼2008-02-26 10:20:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
谢谢各位了..为什么基因组DNA麻烦呢？
赞一下 回复此楼
7楼2008-02-26 15:28:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.而且很有幽默,但是不要让人误会你的意思.
引用回帖:
Originally posted by yuyixst at 2008-2-26 15:28:
谢谢各位了..为什么基因组DNA麻烦呢？

基因组太大了，会有一些与你的引物相似的序列，基因组的结构也太复杂了，用你的引物批的时候特异性不强，有的时候会出来大小不同的好几个条带，有的时候会出现很宽的亮带，宽到从胶孔到最前沿都是亮的，有的时候什么也没有，这个是通过优化PCR条件无法改变的，唯独不会出现的一种情况就是：出现了一条亮带，如果出现了那么你很走运，建议你去买几注彩票！！
赞一下(10人) 回复此楼
8楼2008-02-26 20:56:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
多想楼上各位...拜谢
赞一下 回复此楼
9楼2008-02-27 08:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

GinTonic

金虫 (小有名气)
唉我也要做了
不知道我的运气好不好啊
赞一下 回复此楼
10楼2008-03-06 01:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuyixst 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600，材料与化工321分求调剂 +10 大馋小子 2026-03-28 10/500 2026-03-29 23:35 by 飞行日记西
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +10 辰沐5211314 2026-03-26 10/500 2026-03-29 21:01 by 唐沐儿
[考研] 材料专硕调剂 +5 椰椰。 2026-03-29 5/250 2026-03-29 20:50 by 唐沐儿
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +7 WW.' 2026-03-23 9/450 2026-03-29 12:42 by fmesaito
[考研] 298求调剂 +3 种圣赐 2026-03-29 3/150 2026-03-29 12:06 by longlotian
[考研] 085600，专业课化工原理，321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +6 YYYYYNNNNN 2026-03-26 7/350 2026-03-28 20:52 by 唐沐儿
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +7 Micky11223 2026-03-25 7/350 2026-03-28 18:34 by 无际的草原
[考研] 材料277求调剂 +7 min3 2026-03-24 7/350 2026-03-28 11:39 by xuxiang
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +5 SYA！ 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭