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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 包涵体用TGE缓冲液透析复性需要加尿素吗
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renkeyixin

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体用TGE缓冲液透析复性需要加尿素吗 已有1人参与

8M尿素溶的包涵体，过了NI柱，透析复性时看到大家有用TGE缓冲液，我想问下需要在TGE缓冲液中加入尿素梯度透析吗
还是直接用TGE缓冲液多换几次就可以了
TGE缓冲液配方 ph 7.9
50mM Tris
0.5mM EDTA
50mM Nacl
5%
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1楼 2014-03-27 10:10:47
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renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-03-28 12:35:26
要在TGE缓冲液中加入尿素梯度透析，建议先把蛋白浓度降到0.5mg/ml以下再透析，不过透析会有不同程度的沉淀，有沉淀要及时离心去除沉淀再继续透析。

一般尿素梯度的话最低是到2M吗，那最后透析完蛋白浓度降低了，我要是浓缩的话，里面的盐离子浓度还有甘油尿素的浓度不都升高了啊，请问你具体是怎么透析的啊
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4楼2014-03-31 20:44:17
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lpzl

木虫 (正式写手)
同求同求。。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-03-27 11:14:33
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+10, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2014-03-28 13:53:04
要在TGE缓冲液中加入尿素梯度透析，建议先把蛋白浓度降到0.5mg/ml以下再透析，不过透析会有不同程度的沉淀，有沉淀要及时离心去除沉淀再继续透析。
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3楼2014-03-28 12:35:26
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by renkeyixin at 2014-03-31 20:44:17
一般尿素梯度的话最低是到2M吗，那最后透析完蛋白浓度降低了，我要是浓缩的话，里面的盐离子浓度还有甘油尿素的浓度不都升高了啊，请问你具体是怎么透析的啊...

透析和超滤浓缩以后，盐离子浓度和甘油尿素的浓度不升高，他们都是小分子，可以和水一起透过去。一般尿素梯度从8M到4M到2M，0.2mg/ml蛋白样品和透析溶液的比例大概1:10，透析5~6个小时换一次溶液。到2M以后也可以再降低到1.5M或者1M，可能会有沉淀损耗，有沉淀要及时离心去除沉淀再继续。你试一试吧，可能会失败。
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5楼2014-04-01 08:20:06
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