应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 包涵体用TGE缓冲液透析复性需要加尿素吗
111/2返回列表12下一页
查看: 3529  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

renkeyixin

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体用TGE缓冲液透析复性需要加尿素吗 已有1人参与

8M尿素溶的包涵体，过了NI柱，透析复性时看到大家有用TGE缓冲液，我想问下需要在TGE缓冲液中加入尿素梯度透析吗
还是直接用TGE缓冲液多换几次就可以了
TGE缓冲液配方 ph 7.9
50mM Tris
0.5mM EDTA
50mM Nacl
5%
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-27 10:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)
同求同求。。。
回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-03-27 11:14:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+10, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2014-03-28 13:53:04
要在TGE缓冲液中加入尿素梯度透析，建议先把蛋白浓度降到0.5mg/ml以下再透析，不过透析会有不同程度的沉淀，有沉淀要及时离心去除沉淀再继续透析。
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-28 12:35:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-03-28 12:35:26
要在TGE缓冲液中加入尿素梯度透析，建议先把蛋白浓度降到0.5mg/ml以下再透析，不过透析会有不同程度的沉淀，有沉淀要及时离心去除沉淀再继续透析。

一般尿素梯度的话最低是到2M吗，那最后透析完蛋白浓度降低了，我要是浓缩的话，里面的盐离子浓度还有甘油尿素的浓度不都升高了啊，请问你具体是怎么透析的啊
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-31 20:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by renkeyixin at 2014-03-31 20:44:17
一般尿素梯度的话最低是到2M吗，那最后透析完蛋白浓度降低了，我要是浓缩的话，里面的盐离子浓度还有甘油尿素的浓度不都升高了啊，请问你具体是怎么透析的啊...

透析和超滤浓缩以后，盐离子浓度和甘油尿素的浓度不升高，他们都是小分子，可以和水一起透过去。一般尿素梯度从8M到4M到2M，0.2mg/ml蛋白样品和透析溶液的比例大概1:10，透析5~6个小时换一次溶液。到2M以后也可以再降低到1.5M或者1M，可能会有沉淀损耗，有沉淀要及时离心去除沉淀再继续。你试一试吧，可能会失败。
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-01 08:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-04-01 08:20:06
透析和超滤浓缩以后，盐离子浓度和甘油尿素的浓度不升高，他们都是小分子，可以和水一起透过去。一般尿素梯度从8M到4M到2M，0.2mg/ml蛋白样品和透析溶液的比例大概1:10，透析5~6个小时换一次溶液。到2M以后也可以再 ...

我是说透析完的话蛋白浓度肯定会降低不，这就需要浓缩，这样的话，盐离子浓度和甘油尿素的浓度都升高了啊
赞一下 回复此楼
6楼2014-04-01 08:38:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by renkeyixin at 2014-04-01 08:38:44
我是说透析完的话蛋白浓度肯定会降低不，这就需要浓缩，这样的话，盐离子浓度和甘油尿素的浓度都升高了啊...

不明白？？浓缩为什么，盐离子浓度和甘油尿素的浓度都升高了？？你是用什么方法浓缩的？？
我们做的超滤浓缩只浓缩蛋白，盐离子浓度和甘油尿素的浓度都不升高。
赞一下 回复此楼
7楼2014-04-01 09:38:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-04-01 09:38:33
不明白？？浓缩为什么，盐离子浓度和甘油尿素的浓度都升高了？？你是用什么方法浓缩的？？
我们做的超滤浓缩只浓缩蛋白，盐离子浓度和甘油尿素的浓度都不升高。...

真空浓缩，没有用超滤浓缩
赞一下 回复此楼
8楼2014-04-01 15:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-04-01 09:38:33
不明白？？浓缩为什么，盐离子浓度和甘油尿素的浓度都升高了？？你是用什么方法浓缩的？？
我们做的超滤浓缩只浓缩蛋白，盐离子浓度和甘油尿素的浓度都不升高。...

是直接把蛋白放在透析袋然后用含尿素的TGE缓冲液梯度透析吗?还是需要加什么其他的试剂什么的
赞一下 回复此楼
9楼2014-04-01 15:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by renkeyixin at 2014-04-01 15:46:57
是直接把蛋白放在透析袋然后用含尿素的TGE缓冲液梯度透析吗?还是需要加什么其他的试剂什么的...

你先试试吧。我也很久没做过这样的课题了。祝你好运。
赞一下 回复此楼
10楼2014-04-01 17:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 renkeyixin 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +11 angus9576 2026-08-25 11/550 2026-08-25 17:08 by ZJTJZ
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 18/900 2026-08-25 14:50 by Weed114114
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭