| 查看: 1922 | 回复: 2 | ||
[求助]
真诚求助在六孔板做Caco-2细胞药物转运实验 已有1人参与
|
|
最近在做Caco-2细胞，接种在六孔板的transwell小室上面，可是都养好长时间电阻一直也只有70,80左右，不知道怎么回事 ？ 还有想做成功这个实验的好人，多给我说一些做这个实验的小细节，因为急等毕业，谢谢各位了 |
回复此楼» 猜你喜欢
279分求调剂 一志愿211
已经有16人回复
-
求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601）
已经有5人回复
-
上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境）
已经有3人回复
-
急发核心期刊论文
已经有5人回复
-
291 求调剂
已经有5人回复
-
298-一志愿中国农业大学-求调剂
已经有11人回复
-
一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂
已经有7人回复
-
316求调剂
已经有7人回复
-
材料与化工考研调剂
已经有4人回复
-
一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- MTT测细胞毒性铺板细胞浓度
已经有16人回复
- 请问Caco-2细胞吸收代谢图用什么软件画？
已经有7人回复
- 在Caco-2单层细胞模型中表观渗透系数越大证明此浓度小肠吸收最多
已经有2人回复
- caco2细胞能作为结肠癌细胞模型进行制剂的细胞毒性试验吗
已经有4人回复
- SKOV-3细胞怎么读？是像MCF一样按字母读还是像Caco-2一样可以连读？
已经有3人回复
- caco-2细胞实验-维拉帕米作为p-糖蛋白抑制剂后药物摄取量反而降低了，这是咋回事？
已经有9人回复
- Caco-2细胞模型的建立
已经有7人回复
- 【求助/交流】Caco-2吸收转运实验结果——既抑制吸收又抑制外排是什么原因？
已经有11人回复
2楼2014-06-04 15:13:21
【答案】应助回帖
|
这个原因太多了。因为这个模型要花很长时间，技术环节多，任何一个环节出问题，结果就不妙。所以你的问题较难回答。我按自己认为重要程度的顺序试着不完全的回答： 1. 消化，既要充分又不能过分。 我认为消化环节是Caco-2模型成功的最关键因素之一。在细胞融合度大于95%时进行消化，首先用PBS洗涤一下，吸干再加5mLPBS，放进培养箱孵育5min，尽量去除培养基；吸干加入胰酶消化5min以上，呈细沙状时，加入4倍以上胰酶体积的培养基，用5mL枪使劲吹打(壮男15下，弱女子吹打20下以上)，计数时观察细胞，应该都是单个散在的。如果有2个或以上细胞成团，说明吹打不够；如果细胞大小不一，可能吹打过了。 以250000个细胞/ml的密度接种transwell，隔天换液即可。 2. 污染，培养时间长，半开放培养的模型对无菌操作有很高的要求 无菌操作就不讲了 3. 营养要求高 高塘DMEM培养基，现加NEAA、谷氨酰胺、FBS(GIBCO)，一瓶用完后再配下一瓶 4.细胞层很娇嫩，需要呵护 换液不能用枪，水流速度太大，需要用10ml移液管。在接种后的第一次换液，尤其要温柔。 5.测量电阻的技巧 在培养基中测电阻一般会比HBSS中高；在做转运实验前夜必须换液；HBSS洗涤一次，电阻会降一次，如果信心不足，就不要洗3次了；还可洗涤后，在摇床平衡后再测，电阻会上升一些。 |
3楼2014-06-05 09:52:08
40