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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蓝白斑
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just_bloom

木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑 已有3人参与

连接转化后大肠杆菌挑菌于无菌水中在-20度过夜保藏后会不会死（菌落pcr已检测出），请高手指教。
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1楼 2014-03-18 10:23:53
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-18 14:59:20
水结冻密度变小体积变大，会将细菌胀破。所以结冰过程中可能会死一部分菌。
实际上反复冻融也是一种裂菌的方法。
所以通常要液氮速冻或加入20%的甘油防止结冻过程造成的裂菌。
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2楼2014-03-18 10:41:56
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-18 14:59:24
just_bloom: 金币+17, ★★★很有帮助, 很好的提议，谢谢 2014-03-18 19:19:48
不好说，但是不要冒险。  个人觉得没事， 如果不放心，可以取出来涂板，到晚上看看长不长单克隆。
最好直接放到4度，或者以后保存的时候50%甘油700ul+菌液700ul。
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3楼2014-03-18 10:42:25
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-18 14:59:27
just_bloom: 金币+3, ★★★很有帮助, 多指教 2014-03-18 19:19:22
如果只是存一次，下次就都用完那就没事，要是反复存，需要反复放二十再取出那就不行了，反复冻融会使细胞破碎，菌就死了，最好无菌水里再加甘油。。。
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Someone
4楼2014-03-18 10:44:47
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just_bloom

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 10:41:56
水结冻密度变小体积变大，会将细菌胀破。所以结冰过程中可能会死一部分菌。
实际上反复冻融也是一种裂菌的方法。
所以通常要液氮速冻或加入20%的甘油防止结冻过程造成的裂菌。

PKS蓝白斑------在一个蓝白斑平板上挑的好几个菌落，第一天挑的第一批的菌落pcr电泳上全是目的带，第二天挑的第二批的菌落pcr上除了目的带以外，还有好多条非特异性扩增（杂带都是比较大的带），操作步骤都一样，pcr程序也一样。可能有什么原因导致？
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5楼2014-03-18 20:10:29
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just_bloom

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-03-18 10:44:47
如果只是存一次，下次就都用完那就没事，要是反复存，需要反复放二十再取出那就不行了，反复冻融会使细胞破碎，菌就死了，最好无菌水里再加甘油。。。

PKS蓝白斑------在一个蓝白斑平板上挑的好几个菌落，第一天挑的第一批的菌落pcr电泳上全是目的带，第二天挑的第二批的菌落pcr上除了目的带以外，还有好多条非特异性扩增（杂带都是比较大的带），操作步骤都一样，pcr程序也一样。可能有什么原因导致？
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6楼2014-03-18 20:10:41
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just_bloom

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 10:41:56
水结冻密度变小体积变大，会将细菌胀破。所以结冰过程中可能会死一部分菌。
实际上反复冻融也是一种裂菌的方法。
所以通常要液氮速冻或加入20%的甘油防止结冻过程造成的裂菌。

PKS蓝白斑------在一个蓝白斑平板上挑的好几个菌落，第一天挑的第一批的菌落pcr电泳上全是目的带，第二天挑的第二批的菌落pcr上除了目的带以外，还有好多条非特异性扩增（杂带都是比较大的带），操作步骤都一样，pcr程序也一样。可能有什么原因导致？
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7楼2014-03-18 20:10:55
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just_bloom

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-18 10:42:25
不好说，但是不要冒险。  个人觉得没事， 如果不放心，可以取出来涂板，到晚上看看长不长单克隆。
最好直接放到4度，或者以后保存的时候50%甘油700ul+菌液700ul。

PKS蓝白斑------在一个蓝白斑平板上挑的好几个菌落，第一天挑的第一批的菌落pcr电泳上全是目的带，第二天挑的第二批的菌落pcr上除了目的带以外，还有好多条非特异性扩增（杂带都是比较大的带），操作步骤都一样，pcr程序也一样。可能有什么原因导致？
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8楼2014-03-18 20:11:39
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by just_bloom at 2014-03-18 20:11:39
PKS蓝白斑------在一个蓝白斑平板上挑的好几个菌落，第一天挑的第一批的菌落pcr电泳上全是目的带，第二天挑的第二批的菌落pcr上除了目的带以外，还有好多条非特异性扩增（杂带都是比较大的带），操作步骤都一样，p ...

杂带都是比较大的带？难道是模板太多了跑出质粒来了？
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9楼2014-03-18 20:33:48
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just_bloom

木虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-18 20:33:48
杂带都是比较大的带？难道是模板太多了跑出质粒来了？...

用的是20ul的体系。模板是2ul。而且两次的体系成分一样
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10楼2014-03-18 20:36:15
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