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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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oylb

禁言 (正式写手)

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11楼2014-03-28 19:38:30
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065316

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by oylb at 2014-03-28 19:38:30
不会吧?PCR完了之后DNA都没有了?不可思议,那应该是其他环节问题。“14.5ul回收产物+3ul 10*buffer+2ul dNTP+0.5ul Taq酶”,为什么是3ul 而不是2ul buffer呢?不过这也不会导致DNA消失……

条带亮度不够?还是 ...

那应该是2ul 10*buffer+3ul dNTP?还看到一种做法是巢式PCR 30个循环之后拿出来直接加0.5ul的taq酶延伸10min,这也可以吧。
亮度可能是我之前回收的时候浓度就不大吧。
12楼2014-03-28 22:38:20
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来冉冉

新虫 (初入文坛)

那你现在克隆已经成功了吧 ,我现在我遇到你的问题,克隆3000bp平端片段,但是效率太低,目前还没有好的解决方案,求指点。
13楼2015-06-05 10:52:22
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梓汐

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by oylb at 2014-03-24 10:06:34
是的,PCR产物纯化的目的只是为了更换PCR的buffer。72℃延伸10min,基本上差不多了;你要是不放心,30min也行,虽然差别不大。...

是加胶回收产物做模板和上下游引物、mix 、水  然后直接72℃延伸10min吗
14楼2015-06-06 20:57:54
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 065316 at 2014-03-27 09:53:45
我试了一下,网上看到的。14.5ul回收产物+3ul 10*buffer+2ul dNTP+0.5ul Taq酶,混匀后72℃ 20min。跑胶发现条带亮度不是太够。做了两个样,另外一个居然没有了。...

你这是什么体系,按照正常体系混合就行,混合产物量加大
15楼2015-06-09 09:02:25
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