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钙离子诱导转化问题
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钙离子诱导大肠杆菌转化一直失败，想问一下有什么原因。实验条件如下： 1、取rossetta gami 2菌制备感受态细胞。 2、100微升感受态悬液加入10微升质粒冰浴30分钟。 3、42℃热激2min。 4、快速冷却3min。 5、加入400微升LB液体培养基，37℃温育1h15min。 6、取100微升涂布在含有Amp和氯霉素的平板上37℃倒置培养过夜。 结果：不生长 已知rossetta gami 2菌为氯霉素抗性，另外质粒为以Pet32a质粒为载体的重组质粒（含有Amp抗性基因）。 另外做了BL21的对照组，按上述转化条件，质粒成功转入BL21中并表现Amp抗性。 |
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2楼2014-03-16 13:49:19