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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 厌氧培养产甲烷菌，只见有气泡产生，色谱却测不出甲烷气体怎么办？
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大刀阔斧

新虫 (初入文坛)

[求助] 厌氧培养产甲烷菌，只见有气泡产生，色谱却测不出甲烷气体怎么办？ 已有1人参与

我的培养基是
NH4Cl  1.Og，  K2HPO4  0.4g， KH2PO4  0.4g， MgCl2 0.1g，
甲酸钠  3g， 乙酸钠 3g，酵母膏 0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐  0.3g，甲醇 3.5ml，
0.1% 刃天青 1ml，
维生素溶液 10ml，微量元素溶液 10ml。
接种前分别加5% NaHCO3和1%Na2S.9H2O(0.1ml/5ml培养基)
pH 7.0
培养产气后，气体是手动进样
谁能帮忙看看是哪有问题，为什么测不出甲烷气体，气相色谱仪应该是没有问题的，之前测过。
十分感谢！
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1楼 2014-03-10 21:42:48
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大刀阔斧

新虫 (初入文坛)
非常感谢你的回复，因为是做产甲烷菌的多样性的，所以想用三种底物都加的培养基，我确实不知道样品中有什么样的产甲烷菌。之前做了加青霉素的对照组，对照组也产气，气泡都是先小后大，但是也没测出来甲烷，不过我没有用荧光检测，请教一下荧光检测是想水清片一样做个片子直接在荧光显微镜下看吗？
还想再问一下，我是用棉塞塞的瓶口，在厌氧箱中用进样器抽气然后封住针头再拿出去测气，这样甲烷气体会漏吗？
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3楼2014-03-11 20:09:53
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good！鼓励热心应助！ 2014-03-11 17:38:44
大刀阔斧: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-03-12 09:52:37
既然是培养甲烷菌，应该就是在厌氧箱中操作的，如果是这样，应该就用到混合气，混合气中有CO2和H2,你的培养基中又有甲酸盐、乙酸盐、甲醇等。所以，理论上什么种类的产甲烷菌都会产生甲烷了。但你的实验没有甲烷产出，我觉得有这样一些问题：
1. 为什么甲酸盐、乙酸盐、甲醇这三种成分同时加？再说，培养的甲烷菌你应该知道是什么种类，也应该知道用什么底物啊？如果你所用的菌株是利用乙酸盐的，那么其它两种完全不用添加，而且这时候添加甲醇可能有害处。
2.如果你GC没问题，而实验中又确定已经产气，唯一的可能就是你所接的菌株不是产甲烷菌，而且这种可能性很大。你可以在培养装置中加入抗生素看产气是否有变化，或者取样用荧光显微镜观察，看是否具有荧光。
3.你的甲烷菌中混合有其它菌种，而且混合菌种生长比较快，以至于产气中基本没有甲烷，再多培养几天看看，也许一周以后检测就有甲烷生成了。
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转向地质微生物学
2楼2014-03-11 14:21:12
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 大刀阔斧 at 2014-03-11 20:09:53
非常感谢你的回复，因为是做产甲烷菌的多样性的，所以想用三种底物都加的培养基，我确实不知道样品中有什么样的产甲烷菌。之前做了加青霉素的对照组，对照组也产气，气泡都是先小后大，但是也没测出来甲烷，不过我没 ...

你上面没有描述清楚，如果是做多样性，直接提取总DNA，用古菌引物进行扩增，做DGGE。或者扩增产物构建文库，测序验证，很快就会有结果的。
培养基中添加青霉素是常用的做法，但除甲烷菌以外，还有很多的微生物对抗生素也是有抗性的，所以，培养时可考虑添加多种抗生素。
另外，培养时建议你买厌氧瓶或厌氧管，塞棉塞是很不靠谱的事。
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转向地质微生物学
4楼2014-03-12 08:57:14
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大刀阔斧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liujianmin68 at 2014-03-12 08:57:14
你上面没有描述清楚，如果是做多样性，直接提取总DNA，用古菌引物进行扩增，做DGGE。或者扩增产物构建文库，测序验证，很快就会有结果的。
培养基中添加青霉素是常用的做法，但除甲烷菌以外，还有很多的微生物对抗 ...

DGGE我们也做，富集培养是想做个对比，能说一下检测菌体荧光的具体操作吗？
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5楼2014-03-12 09:51:23
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