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大刀阔斧

新虫 (初入文坛)

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[求助] 厌氧培养产甲烷菌，只见有气泡产生，色谱却测不出甲烷气体怎么办？已有1人参与

我的培养基是
NH4Cl 1.Og， K2HPO4 0.4g， KH2PO4 0.4g， MgCl2 0.1g，
甲酸钠 3g，乙酸钠 3g，酵母膏 0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐 0.3g，甲醇 3.5ml，
0.1% 刃天青 1ml，
维生素溶液 10ml，微量元素溶液 10ml。
接种前分别加5% NaHCO3和1%Na2S.9H2O(0.1ml/5ml培养基)
pH 7.0
培养产气后，气体是手动进样
谁能帮忙看看是哪有问题，为什么测不出甲烷气体，气相色谱仪应该是没有问题的，之前测过。
十分感谢！

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1楼2014-03-10 21:42:48

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大刀阔斧

新虫 (初入文坛)

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非常感谢你的回复，因为是做产甲烷菌的多样性的，所以想用三种底物都加的培养基，我确实不知道样品中有什么样的产甲烷菌。之前做了加青霉素的对照组，对照组也产气，气泡都是先小后大，但是也没测出来甲烷，不过我没有用荧光检测，请教一下荧光检测是想水清片一样做个片子直接在荧光显微镜下看吗？
还想再问一下，我是用棉塞塞的瓶口，在厌氧箱中用进样器抽气然后封住针头再拿出去测气，这样甲烷气体会漏吗？

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3楼2014-03-11 20:09:53

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大刀阔斧

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引用回帖:

4楼: Originally posted by liujianmin68 at 2014-03-12 08:57:14
你上面没有描述清楚，如果是做多样性，直接提取总DNA，用古菌引物进行扩增，做DGGE。或者扩增产物构建文库，测序验证，很快就会有结果的。
培养基中添加青霉素是常用的做法，但除甲烷菌以外，还有很多的微生物对抗 ...

DGGE我们也做，富集培养是想做个对比，能说一下检测菌体荧光的具体操作吗？

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5楼2014-03-12 09:51:23

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