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大刀阔斧

新虫 (初入文坛)

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[求助] 厌氧培养产甲烷菌，只见有气泡产生，色谱却测不出甲烷气体怎么办？已有1人参与

我的培养基是
NH4Cl 1.Og， K2HPO4 0.4g， KH2PO4 0.4g， MgCl2 0.1g，
甲酸钠 3g，乙酸钠 3g，酵母膏 0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐 0.3g，甲醇 3.5ml，
0.1% 刃天青 1ml，
维生素溶液 10ml，微量元素溶液 10ml。
接种前分别加5% NaHCO3和1%Na2S.9H2O(0.1ml/5ml培养基)
pH 7.0
培养产气后，气体是手动进样
谁能帮忙看看是哪有问题，为什么测不出甲烷气体，气相色谱仪应该是没有问题的，之前测过。
十分感谢！

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1楼2014-03-10 21:42:48

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liujianmin68

木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good！鼓励热心应助！ 2014-03-11 17:38:44
大刀阔斧: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-03-12 09:52:37

既然是培养甲烷菌，应该就是在厌氧箱中操作的，如果是这样，应该就用到混合气，混合气中有CO2和H2,你的培养基中又有甲酸盐、乙酸盐、甲醇等。所以，理论上什么种类的产甲烷菌都会产生甲烷了。但你的实验没有甲烷产出，我觉得有这样一些问题：
1. 为什么甲酸盐、乙酸盐、甲醇这三种成分同时加？再说，培养的甲烷菌你应该知道是什么种类，也应该知道用什么底物啊？如果你所用的菌株是利用乙酸盐的，那么其它两种完全不用添加，而且这时候添加甲醇可能有害处。
2.如果你GC没问题，而实验中又确定已经产气，唯一的可能就是你所接的菌株不是产甲烷菌，而且这种可能性很大。你可以在培养装置中加入抗生素看产气是否有变化，或者取样用荧光显微镜观察，看是否具有荧光。
3.你的甲烷菌中混合有其它菌种，而且混合菌种生长比较快，以至于产气中基本没有甲烷，再多培养几天看看，也许一周以后检测就有甲烷生成了。

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转向地质微生物学

2楼2014-03-11 14:21:12

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liujianmin68

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【答案】应助回帖

引用回帖:

3楼: Originally posted by 大刀阔斧 at 2014-03-11 20:09:53
非常感谢你的回复，因为是做产甲烷菌的多样性的，所以想用三种底物都加的培养基，我确实不知道样品中有什么样的产甲烷菌。之前做了加青霉素的对照组，对照组也产气，气泡都是先小后大，但是也没测出来甲烷，不过我没 ...

你上面没有描述清楚，如果是做多样性，直接提取总DNA，用古菌引物进行扩增，做DGGE。或者扩增产物构建文库，测序验证，很快就会有结果的。
培养基中添加青霉素是常用的做法，但除甲烷菌以外，还有很多的微生物对抗生素也是有抗性的，所以，培养时可考虑添加多种抗生素。
另外，培养时建议你买厌氧瓶或厌氧管，塞棉塞是很不靠谱的事。

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转向地质微生物学

4楼2014-03-12 08:57:14

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