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bio_weiyaya金虫 (正式写手)
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色谱柱平衡 已有2人参与
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目前所在做的C18(4.6*250mm)HPLC分析中关于柱平衡有一些问题 基本情况：柱子保存在100%甲醇中，分析所用流动相为甲醇：水。每次柱平衡都是梯度平衡，即从100%甲醇过渡到分析所用比例，在此比例下直至基线平稳。 问题1：梯度平衡正确吗？0.5ml/min流速下，大概多长时间变换一下甲醇和水的比例，变换的幅度多大合适。 2：通常所说的15-20倍柱体积平衡柱子，是从基线平稳开始算起还是其他？ 3：做过几次实验，100%甲醇过渡到分析用比例大概有1h，基线平稳10min进样，样品保留时间5.9min，正常是7.6min。后又在极限平稳之后运行1h左右，保留时间变化至6.4min，若改成两小时仍然为6.4min。 基于以上试验情况，我分析是平衡方法不对，请大家给点意见，如果需要更多信息，我再给添上，还有金币。 |
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【答案】应助回帖
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1：梯度平衡无所谓正确与否，只是楼主这样做有点麻烦。楼主测样的方法是用梯度还是等度？因为楼主没有用盐，所以直接平衡。比如你是甲醇：水=60:40，你就直接用这个比例的流动相来平衡；如果是梯度，使用初试比例平衡； 2：通常所说的15-20倍柱体积平衡柱子并不绝对，只要基线平了就进样。比如甲醇：水=60:40冲基线，基线15分钟的波动在0.02还是0.2AU就可以进样了，不需要平衡那么久，而且甲醇-水还是比较容易平衡的。您用的是啥机子，如果是agilent或者waters甲醇-水冲20分钟就进样了，如果感觉不行，进标样前多进几针空白就可以了。 3：第三个有点没看懂 上个图中不？ |
bio_weiyaya2楼2014-03-10 19:41:10
bio_weiyaya
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