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[交流]
请教有关厌氧菌筛选与分离的问题
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首先给小木虫里的全体虫友们拜个年，祝大家戊子鼠年万事如意！ 我的研究方向是利用厌氧菌处理废水中难降解有机物。以前都是用厌氧的混合菌群做实验，取得一定效果，现在想将课题深入做下去，打算筛选分离出单一的纯菌种，但我对微生物筛选并不熟悉，听说实验周期比较长，请各位虫友帮忙解决一些疑惑并提出一些建议。谢谢。 问题：经过简单驯化后，厌氧微生物的筛选和分离实验的周期大概需要多长时间？主要难点是什么？ |
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2楼2008-02-13 08:24:13
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推荐你2篇文章：Isolation and Characterization of a New Clostridium sp. That Performs Effective Cellulosic Waste Digestion in a Thermophilic Methanogenic Bioreactor AEM.72.5.3702–3709.2006 Clostridium straminisolvens sp. nov., a moderately thermophilic, aerotolerant and cellulolytic bacterium isolated from a cellulose-degrading bacterial community November 1, 2004 就如2楼所说，筛选厌氧单菌，厌氧培养装置比较重要，最好是厌氧培养箱中进行菌种继代培养。再有就是培养基（碳源）等的限制培养，我也分离厌氧单菌，感觉并不很容易，运气好，平板可以长，运气不好，即使是在厌氧条件下，很难在平板上长出单菌落，所以，有时培养基的选择也很重要。 |
3楼2008-02-13 14:06:19
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我实验中要降解的是单一有机物，用的主要设备是厌氧手套箱。 3楼的虫友讲得很实诚，我也认为培养基的选择十分重要（尤其是碳源的选择）。我做的是难降解有机物，以它为唯一碳源能不能分离出纯菌种还是未知数（因为前期的实验结论有可能是多种菌群共同作用的结果）。现在面临的是两个问题：一是外加有机碳源会对纯菌种的分离造成什么样的影响？二是国外有人用CO2充当碳源，不知道有虫友做过吗？认为可不可行？ 我现在是硕士研究生二年级，希望和您交个朋友，一起学习交流。我的QQ：18120884， E-mail：slthree@163.com。 谢谢2楼和3楼的虫友！谢谢3楼虫友推荐的文章！ |
4楼2008-02-13 15:48:35
booksworm
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我个人觉得你现在的应该这样做下去，因为你的目的是研究混合菌群中哪种菌对难降解的物质据有降解作用：第一步，你首先必须保证你的混合菌群都能活下来，这样才能筛选分离；第二步，分离；第三步：筛选。 既然你以前做过在厌氧的环境下培养微生物，所以怎样培养或者用什么培养箱就不是要讨论的话题了。要保证你的混合菌群都能活下来，你可以考虑采用非常丰富的培养基，象一般培养细菌用LB培养基，营养丰富，菌体生长良好；在生在良好的培养基上分离单菌落，可以通过观察菌落的形态等确定在你的培养物中究竟有多少种的培养物；第二就是对分单的菌落进行划线，进一步的分离、纯化你的培养物；第三步用你分离纯化的培养物再去降解你的难降解物，观察降解效果。最后下结论。 这仅提供参考。 |
5楼2008-02-14 14:27:47
6楼2008-02-15 02:53:32
booksworm
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asr(金币+3,VIP+0)::P 多谢。
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这就是做生物的和工科的不同，一般我看生物的做实验文献，就是这样：以单一有机物为底物，培养单菌落，以一种或几种最有效的然后分离鉴定，做机理，一股脑做下去。做工科的是混和做，先不管是什么，只要有效就行，但这样使得应用效果有限，因此现在许多环境做的好的实验室也转向机理与工艺并重。 因此我想你可以以单一有机物为底物，培养基上分离鉴定单菌落，然后可分两条路，一条路就是菌种间组合，得出合适高效降解工艺；另一条就是菌种鉴定，做机理。看到的文献一般再复杂的有机物都有菌可以将其代谢的。只不过菌种多，途径多，效率高。 一点建议！ |
10楼2008-02-17 16:50:56
