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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 做western电泳时溴酚蓝总是连在一起，而且很粗，是不是上样缓冲液加多了或者有杂质？
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野草妮妮

金虫 (小有名气)

[求助] 做western电泳时溴酚蓝总是连在一起，而且很粗，是不是上样缓冲液加多了或者有杂质？ 已有2人参与

做western遇到的问题，希望大家来讨论一下：
电泳时候需要冰浴操作吗？缓冲液是5X的，按照蛋白样品与上样缓冲液4:1加。
Marker跑的很漂亮，分的也很开，是不是电泳条件是合适的？
曝光之后，条带不直，而且也是连在一起的。
转膜之后发现下层滤纸有Marker的颜色，是不是转膜过头了？
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1楼 2014-03-07 14:16:40
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探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电泳不需要冰浴   转膜才冰浴  条带不直 可能跟胶有关  就是胶可能不均匀
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相信什么才会得到什么
3楼2014-03-07 16:25:29
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csup123

捐助贵宾 (正式写手)

懒虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电泳不需要冰浴；条件要摸，总体还得看你的条带跑得怎么样；条带歪了考虑1做胶时拔梳子是不是弄歪了2是不是有孔没加样或是量相差比较大3上样不纯；滤纸上有marker多少是转过了一点
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哦
2楼2014-03-07 14:24:39
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