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野草妮妮

金虫 (小有名气)

[求助] 做western电泳时溴酚蓝总是连在一起,而且很粗,是不是上样缓冲液加多了或者有杂质? 已有2人参与

做western遇到的问题,希望大家来讨论一下:
电泳时候需要冰浴操作吗?缓冲液是5X的,按照蛋白样品与上样缓冲液4:1加。
Marker跑的很漂亮,分的也很开,是不是电泳条件是合适的?
曝光之后,条带不直,而且也是连在一起的。
转膜之后发现下层滤纸有Marker的颜色,是不是转膜过头了?
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探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电泳不需要冰浴   转膜才冰浴  条带不直 可能跟胶有关  就是胶可能不均匀
相信什么才会得到什么
3楼2014-03-07 16:25:29
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csup123

捐助贵宾 (正式写手)

懒虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电泳不需要冰浴;条件要摸,总体还得看你的条带跑得怎么样;条带歪了考虑1做胶时拔梳子是不是弄歪了2是不是有孔没加样或是量相差比较大3上样不纯;滤纸上有marker多少是转过了一点
2楼2014-03-07 14:24:39
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