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ATP对蛋白稳定性的影响
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| 在做蛋白与tRNA的binding实验时，加了ATP导致蛋白沉淀，ATP浓度为10mM，加AMP或AMPPNP代替，情况稍微好一点，但也有部分沉淀。因为没有加氨基酸，所以应该还没有反应，是因为静电作用或是空间位阻的原因引起蛋白构型发生较大变化而沉淀吗？还请各位了解tRNA氨酰化过程的帮忙分析下原因呀。。。 |
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lihe131
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10楼2014-03-07 10:41:36
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【答案】应助回帖
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笔冰河: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-06 16:49:08
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蛋白能与RNA结合，说明蛋白表面是带正电的，ATP是酸性的，加了ATP导致酸碱中和，降低了蛋白质的溶解度，所以沉淀。 ATP的酸性很强，请问你配制ATP时有没有用NaOH调pH值啊？最好把ATP调成近似中性的，吸一微升用pH试纸检测就行。 如果还不行的话，可能要改变一下蛋白所处缓冲液的pH值。 如果还不行的话，考虑增加一下离子强度，总之问题应该是出在蛋白溶解度上，往这个方向改进实验应该会有帮助。 希望对你有帮助。  |
2楼2014-03-05 18:25:40
3楼2014-03-06 18:30:35
4楼2014-03-06 19:57:13