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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 降解菌
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wanyld

新虫 (初入文坛)

[求助] 降解菌 已有1人参与

求一株壬基酚降解菌，或是酚类的降解菌，或是开苯环的降解菌，最好是已经鉴定的高效降解纯菌，可购买。
有亲知道哪里有，也请提供点信息，么么哒，谢啦。
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1楼 2014-03-04 09:56:15
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+5, MicEPI+1, good 2014-03-04 15:20:55
对酶活要求如何？
这就是一个本科微生物实验的基础综合实验之一。书上都有，也是我本科做的一个实验之一，周期大约9天即可得到能够降解苯酚的菌株。
具体做法仅供参考和各位虫友讨论：
1. 取土壤（取样都是常识，菜园、淤泥、落叶层等），无菌水重悬离心，接种约10 uL上清至LB培养基，37度摇床培养约36 h。
2. 将得到的菌悬液梯度稀释，分别取适量（约20 uL）涂平板（以苯酚为唯一碳源的富集培养基固体平板），37度培养约48 h。
3. 将得到的单菌落，划线涂布，分离菌落；平板采用以苯酚为唯一碳源的分离培养基，37度培养约48 h。
4.得到的单菌落即为可降解苯酚的细菌，单菌落周围在平板上形成的透明圈越大，代表酶活越高，根据自己的需要选择，接种LB，保藏甘油管。

整个过程顺利1周可完成。如需其它降解菌，将苯酚改为你的被降解底物即可。
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2楼2014-03-04 11:42:02
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wanyld

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-04 11:42:02
对酶活要求如何？
这就是一个本科微生物实验的基础综合实验之一。书上都有，也是我本科做的一个实验之一，周期大约9天即可得到能够降解苯酚的菌株。
具体做法仅供参考和各位虫友讨论：
1. 取土壤（取样都是常识， ...

谢谢。
这样分离出来的菌株降解能力不一定额，还要后期驯化，比较麻烦。
我想要的是已经鉴定过的能高效降解的菌株，我只想要壬基酚快速降解的过程，是什么菌并不关心。
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3楼2014-03-04 13:46:37
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wanyld at 2014-03-04 13:46:37
谢谢。
这样分离出来的菌株降解能力不一定额，还要后期驯化，比较麻烦。
我想要的是已经鉴定过的能高效降解的菌株，我只想要壬基酚快速降解的过程，是什么菌并不关心。...

别人做出这样的菌都是有自己课题需要的，会给你吗？
有特定要求的直接看是否有商业化的菌体出售吧，查查各大菌种保藏中心有没有。
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4楼2014-03-04 14:44:03
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wanyld

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-04 14:44:03
别人做出这样的菌都是有自己课题需要的，会给你吗？
有特定要求的直接看是否有商业化的菌体出售吧，查查各大菌种保藏中心有没有。...

我分出来在LB平板上只长了一种菌，淡黄色的圆点，接种到分离平板上不长了就。
不是应该有很多种菌么？这是什么情况？
求助！
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5楼2014-03-13 13:34:46
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wanyld at 2014-03-13 13:34:46
我分出来在LB平板上只长了一种菌，淡黄色的圆点，接种到分离平板上不长了就。
不是应该有很多种菌么？这是什么情况？
求助！...

你需要说一下具体的情况，前面都做了些什么，做到哪一步，什么现象。
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6楼2014-03-13 19:33:30
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wanyld

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-13 19:33:30
你需要说一下具体的情况，前面都做了些什么，做到哪一步，什么现象。...

称取沉积物样1g，放入盛9ml无菌水的离心管中，涡旋均匀，使土样与水充分混合，将细胞分散梯度稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的混合液溶液，取10-4、10-5、10-6稀释度下0.1ml涂布在LB平板上，30℃下光照培养24h后可见淡黄色的圆点状东西，就这一种。
差不多就这样了。
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7楼2014-03-13 21:32:06
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wanyld at 2014-03-13 21:32:06
称取沉积物样1g，放入盛9ml无菌水的离心管中，涡旋均匀，使土样与水充分混合，将细胞分散梯度稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的混合液溶液，取10-4、10-5、10-6稀释度下0.1ml涂布在LB平板上， ...

我前面的步骤其实也说了，土壤样品处理后，先接液体LB摇床培养为好，保证菌的活性和传代能力。直接到平板比较难。

虽然样品稀释后肯定有菌，原理上讲直接接平板是要长菌的，但是建议还是不要偷懒的好。
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8楼2014-03-13 23:09:35
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wanyld at 2014-03-13 21:32:06
称取沉积物样1g，放入盛9ml无菌水的离心管中，涡旋均匀，使土样与水充分混合，将细胞分散梯度稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的混合液溶液，取10-4、10-5、10-6稀释度下0.1ml涂布在LB平板上， ...

如果接种液体LB摇床培养都没有菌长出的话，那就是你取样的问题了。
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9楼2014-03-13 23:10:20
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wanyld

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-13 23:10:20
如果接种液体LB摇床培养都没有菌长出的话，那就是你取样的问题了。...

菌是有的，圆点状的淡黄色，但是只有这一种，感觉应该有很多种的呀。
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10楼2014-03-14 15:55:57
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