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wanyld

新虫 (初入文坛)

[求助] 降解菌 已有1人参与

求一株壬基酚降解菌,或是酚类的降解菌,或是开苯环的降解菌,最好是已经鉴定的高效降解纯菌,可购买。
有亲知道哪里有,也请提供点信息,么么哒,谢啦。
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dllchina: 金币+5, MicEPI+1, good 2014-03-04 15:20:55
对酶活要求如何?
这就是一个本科微生物实验的基础综合实验之一。书上都有,也是我本科做的一个实验之一,周期大约9天即可得到能够降解苯酚的菌株。
具体做法仅供参考和各位虫友讨论:
1. 取土壤(取样都是常识,菜园、淤泥、落叶层等),无菌水重悬离心,接种约10 uL上清至LB培养基,37度摇床培养约36 h。
2. 将得到的菌悬液梯度稀释,分别取适量(约20 uL)涂平板(以苯酚为唯一碳源的富集培养基固体平板),37度培养约48 h。
3. 将得到的单菌落,划线涂布,分离菌落;平板采用以苯酚为唯一碳源的分离培养基,37度培养约48 h。
4.得到的单菌落即为可降解苯酚的细菌,单菌落周围在平板上形成的透明圈越大,代表酶活越高,根据自己的需要选择,接种LB,保藏甘油管。

整个过程顺利1周可完成。如需其它降解菌,将苯酚改为你的被降解底物即可。
2楼2014-03-04 11:42:02
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wanyld

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-04 11:42:02
对酶活要求如何?
这就是一个本科微生物实验的基础综合实验之一。书上都有,也是我本科做的一个实验之一,周期大约9天即可得到能够降解苯酚的菌株。
具体做法仅供参考和各位虫友讨论:
1. 取土壤(取样都是常识, ...

谢谢。
这样分离出来的菌株降解能力不一定额,还要后期驯化,比较麻烦。
我想要的是已经鉴定过的能高效降解的菌株,我只想要壬基酚快速降解的过程,是什么菌并不关心。
3楼2014-03-04 13:46:37
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wanyld at 2014-03-04 13:46:37
谢谢。
这样分离出来的菌株降解能力不一定额,还要后期驯化,比较麻烦。
我想要的是已经鉴定过的能高效降解的菌株,我只想要壬基酚快速降解的过程,是什么菌并不关心。...

别人做出这样的菌都是有自己课题需要的,会给你吗?
有特定要求的直接看是否有商业化的菌体出售吧,查查各大菌种保藏中心有没有。
4楼2014-03-04 14:44:03
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wanyld

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-04 14:44:03
别人做出这样的菌都是有自己课题需要的,会给你吗?
有特定要求的直接看是否有商业化的菌体出售吧,查查各大菌种保藏中心有没有。...

我分出来在LB平板上只长了一种菌,淡黄色的圆点,接种到分离平板上不长了就。
不是应该有很多种菌么?这是什么情况?
求助!
5楼2014-03-13 13:34:46
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wanyld at 2014-03-13 13:34:46
我分出来在LB平板上只长了一种菌,淡黄色的圆点,接种到分离平板上不长了就。
不是应该有很多种菌么?这是什么情况?
求助!...

你需要说一下具体的情况,前面都做了些什么,做到哪一步,什么现象。
6楼2014-03-13 19:33:30
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wanyld

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-13 19:33:30
你需要说一下具体的情况,前面都做了些什么,做到哪一步,什么现象。...

称取沉积物样1g,放入盛9ml无菌水的离心管中,涡旋均匀,使土样与水充分混合,将细胞分散梯度稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的混合液溶液,取10-4、10-5、10-6稀释度下0.1ml涂布在LB平板上,30℃下光照培养24h后可见淡黄色的圆点状东西,就这一种。
差不多就这样了。
7楼2014-03-13 21:32:06
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wanyld at 2014-03-13 21:32:06
称取沉积物样1g,放入盛9ml无菌水的离心管中,涡旋均匀,使土样与水充分混合,将细胞分散梯度稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的混合液溶液,取10-4、10-5、10-6稀释度下0.1ml涂布在LB平板上, ...

我前面的步骤其实也说了,土壤样品处理后,先接液体LB摇床培养为好,保证菌的活性和传代能力。直接到平板比较难。

虽然样品稀释后肯定有菌,原理上讲直接接平板是要长菌的,但是建议还是不要偷懒的好。
8楼2014-03-13 23:09:35
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wanyld at 2014-03-13 21:32:06
称取沉积物样1g,放入盛9ml无菌水的离心管中,涡旋均匀,使土样与水充分混合,将细胞分散梯度稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的混合液溶液,取10-4、10-5、10-6稀释度下0.1ml涂布在LB平板上, ...

如果接种液体LB摇床培养都没有菌长出的话,那就是你取样的问题了。
9楼2014-03-13 23:10:20
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wanyld

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-13 23:10:20
如果接种液体LB摇床培养都没有菌长出的话,那就是你取样的问题了。...

菌是有的,圆点状的淡黄色,但是只有这一种,感觉应该有很多种的呀。
10楼2014-03-14 15:55:57
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