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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组抗体
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fyw921

铜虫 (小有名气)

[求助] 重组抗体 已有3人参与

大家好，最近一个使用我的目的是从杂交瘤细胞中提取RNA反转录，测序。测序的可变区连接小鼠的恒定区，构建到商品化的载体上用于体外大规模培养产生抗体。
但是现在遇到问题是：重新接恒定区后抗体没有活性，但是从小鼠腹水提取的抗体活性很好！
大家帮忙想一想是什么地方没有处理好！谢谢
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1楼 2014-03-03 13:35:54
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水中小鱼

木虫 (正式写手)
★
fyw921(金币+1): 谢谢参与
不太清楚

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-03-03 13:36:22
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fyw921(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励交流 2014-03-04 10:16:18
你需要多试几个克隆，有的克隆做重组抗体前就已经丢失了，而克隆做之前需要检ELISA,WB等，
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星陈代谢
3楼2014-03-03 15:54:02
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fyw921(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励交流 2014-03-04 10:16:46
fyw921: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-03-04 15:15:43
是你提的基因就不对吧，轻链是有假基因的，还有如果你的兼并引物是在FR1区设计的话就会出现没有活性的情况，如果是在信号肽区设计的话一般就没有问题
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4楼2014-03-04 09:13:27
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fyw921

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huoyongting at 2014-03-04 09:13:27
是你提的基因就不对吧，轻链是有假基因的，还有如果你的兼并引物是在FR1区设计的话就会出现没有活性的情况，如果是在信号肽区设计的话一般就没有问题

用的是novagen 的Ig-Primer Sets引物，是从信号肽区设计的，应该木有问题
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5楼2014-03-04 15:17:03
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by fyw921 at 2014-03-04 15:17:03
用的是novagen 的Ig-Primer Sets引物，是从信号肽区设计的，应该木有问题...

那只要确定不是假基因一般就没问题
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6楼2014-03-05 17:30:03
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fmp0801

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是链接除了问题？考虑再做一次链接，在检测一次
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科研不容易
7楼2014-03-28 13:53:39
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