24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3832  |  回复: 20

qhh835

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是??是酶的活性,我以??加的酶??少会出现这??情况,你们的taq酶是??是放时间长了

[ ????С??????? ]
11楼2014-02-26 07:24:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiyiyaya

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-02-25 18:25:00
1模板是新提的基因组,条带很清晰
2正对照是指?做一个16s PCR可以么
3我们PCR仪不支持touch down,直接拿PCR产物做模板进行二轮PCR?
4由于目的基因序列不是很清楚,只能摸索引物,也用过兼并引物,这组引物算 ...

正对照就是一定能扩增出来的产物。保证基因组和PCR程序的可信性。只要是组成表达的基因都行。
二轮PCR就是拿PCR产物做模板,最好在理论上大小的位置将胶切下回收。
但是引物要缩小一些范围,就是在你第一轮引物的内部再来一对,主要是为了排除非特异,再多扩增一些。有的PCR的产物很少,第二轮或许能看见。祝好。
12楼2014-02-26 09:52:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谢伊莹

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by mjt2007 at 2014-02-26 04:49:37
没有基因序列建议先克隆出这个基因。好运!
...

明白,胶回收的图片这个水平,觉得回收不来,做不了克隆,您觉得可以回收么~
13楼2014-02-26 21:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谢伊莹

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wang6rrtoy at 2014-02-25 19:15:51
建议变性94℃  45s,褪火55℃  45s,可能是你这两个步骤的时间太短了,所以DNA复制的很少。同时Nanodrop看下模板的质量,依本人经验而言,一般PCR体系模板的浓度控制在1ng为好!

如果DNA复制的少会造成这种类似弥散的状况?我也觉得变性和退火的时间和一般程序比太短了,打算试试延长时间~
14楼2014-02-26 21:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谢伊莹

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wang6rrtoy at 2014-02-25 19:15:51
建议变性94℃  45s,褪火55℃  45s,可能是你这两个步骤的时间太短了,所以DNA复制的很少。同时Nanodrop看下模板的质量,依本人经验而言,一般PCR体系模板的浓度控制在1ng为好!

明白,我也觉得这两步的时间相对正常PCR程序有点太短,但是PCR程序短应该是条带不亮,能造成这种模糊状态么,想和大家多交流交流~
15楼2014-02-26 21:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wang6rrtoy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-02-26 21:16:39
明白,我也觉得这两步的时间相对正常PCR程序有点太短,但是PCR程序短应该是条带不亮,能造成这种模糊状态么,想和大家多交流交流~...

你最下端的应该是引物二聚体。我做是时候有时也会有条带比较模糊的情况,建议你更换下电泳液。另外你电泳仪电流输出不稳也可能造成这种情况。以上都是我自己总结的,仅供你参考一下。。
好好学习
16楼2014-02-26 22:23:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiaozheng1

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-02-25 18:14:08
目的条带1400bp左右,有一篇相关文献的退火时间是10s,所以就一直用这个时间,这个温度了...

这个温度确实有点低,请参照酶的说明书

[ 发自小木虫客户端 ]
17楼2014-02-27 00:15:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-02-26 21:08:05
明白,胶回收的图片这个水平,觉得回收不来,做不了克隆,您觉得可以回收么~...

可以试试,克隆模板有一点就可以了。同时再从头重做一次。好运!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
18楼2014-02-27 07:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

期待zcj

新虫 (初入文坛)

我也是遇到同样问题,一直在调试pcr反应体系
19楼2014-02-27 10:32:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谢伊莹

木虫 (正式写手)

???????:
11?: Originally posted by qhh835 at 2014-02-26 07:24:45
是??是酶的活性,我以??加的酶??少会出现这??情况,你们的taq酶是??是放时间长了

????????????????????????????鷳????????лл~
20楼2014-02-27 20:48:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 谢伊莹 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +19 土豆er? 2026-04-09 20/1000 2026-04-09 20:33 by maddjdld
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +5 汪某. 2026-04-09 5/250 2026-04-09 15:38 by 蒋皓禹
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +18 梁富贵险中求 2026-04-04 20/1000 2026-04-09 11:18 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 315求调剂 +17 欣喜777 2026-04-04 18/900 2026-04-08 13:54 by hangsimei
[考研] 277、学硕,求调剂 数一104, +11 瓶子PZ 2026-04-07 12/600 2026-04-07 23:30 by 一只好果子?
[考研] 调剂 +18 不逢春 2026-04-05 19/950 2026-04-07 22:04 by lijunpoly
[考研] 农学,求调剂,314分 +4 访客记录可爱 2026-04-04 4/200 2026-04-07 21:07 by 等岸
[考研] 生物学363调剂求助 +7 fanzhang6666 2026-04-06 9/450 2026-04-07 17:37 by lijunpoly
[考研] 复试调剂 +9 春日来信- 2026-04-03 9/450 2026-04-07 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 材料工程302分求调剂 +13 zyx上岸! 2026-04-04 13/650 2026-04-07 11:14 by 诗与自由
[考研] 295求调剂 +18 xndjjj 2026-04-04 19/950 2026-04-07 11:02 by wangjy2002
[考研] 338求调剂 +4 我想上岸ii 2026-04-05 4/200 2026-04-06 21:04 by 木子君1218
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +3 李政莹 2026-04-06 3/150 2026-04-06 19:02 by macy2011
[考研] 22408 总分320,一篇论文二作,两个国三,求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 考研调剂 +11 小sun要好运 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:02 by qlm5820
[考研] 调剂 +8 熊二想上岸 2026-04-04 8/400 2026-04-05 05:27 by houyaoxu
[考研] 求调剂 +4 压力??大 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:36 by 啵啵啵0119
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
信息提示
请填处理意见