24小时热门版块排行榜    

查看: 4092  |  回复: 20
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

谢伊莹

木虫 (正式写手)

[求助] PCR条带不清晰 已有6人参与

如题,如图,marker为 2000bp,两块胶中最亮的那个泳道就是marker,左胶共有三个泳道,与marker比,第一条带和第二条带之间的位置模糊不清的是目的条带,右图同样,marker和marker右侧的五个泳道有样品,第一条带和第二条带之间的位置模糊不清的是目的条带,条件:94 5min 94 10s 52 10s 72 1min30s 72 7min,体系:Mg2+ 0.7 dNTP 0.8 上下游引物 1 模板 1 buffer 1 ddH2O 4.3 Taq 0.2,求指教
PCR条带不清晰
p胶回收PCR-pP-1210P-1210J-1216P-1216J-14224.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谢伊莹

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shiyiyaya at 2014-02-24 21:55:18
1.查看模板来源,纯度、浓度是否够。
2.选择一个正对照,保证PCR系统没问题。
3. touch-down 或者二轮PCR,或许可以试试。
4. 可以考虑重新调整引物。
祝好!

1模板是新提的基因组,条带很清晰
2正对照是指?做一个16s PCR可以么
3我们PCR仪不支持touch down,直接拿PCR产物做模板进行二轮PCR?
4由于目的基因序列不是很清楚,只能摸索引物,也用过兼并引物,这组引物算是筛选出的比较好的
谢谢,期待进一步回复~
5楼2014-02-25 18:25:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-25 15:16:32
1.查看模板来源,纯度、浓度是否够。
2.选择一个正对照,保证PCR系统没问题。
3. touch-down 或者二轮PCR,或许可以试试。
4. 可以考虑重新调整引物。
祝好!
2楼2014-02-24 21:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目的条带大小有没有搞错---52℃10s?有没有考虑到酶的延伸速度?
学习使你立于不败之地
3楼2014-02-24 22:44:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谢伊莹

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-02-24 22:44:53
目的条带大小有没有搞错---52℃10s?有没有考虑到酶的延伸速度?

目的条带1400bp左右,有一篇相关文献的退火时间是10s,所以就一直用这个时间,这个温度了
4楼2014-02-25 18:14:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:52 by o3EMxHUAQDtS
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:40 by o3EMxHUAQDtS
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 01:30 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
请填处理意见