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谢伊莹

木虫 (正式写手)

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[求助] PCR条带不清晰已有6人参与

如题，如图，marker为 2000bp，两块胶中最亮的那个泳道就是marker，左胶共有三个泳道，与marker比，第一条带和第二条带之间的位置模糊不清的是目的条带，右图同样，marker和marker右侧的五个泳道有样品，第一条带和第二条带之间的位置模糊不清的是目的条带，条件：94 5min 94 10s 52 10s 72 1min30s 72 7min，体系：Mg2+ 0.7 dNTP 0.8 上下游引物 1 模板 1 buffer 1 ddH2O 4.3 Taq 0.2，求指教

p胶回收PCR-pP-1210P-1210J-1216P-1216J-14224.jpg

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1楼2014-02-24 21:17:35

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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 谢伊莹 at 2014-02-25 18:25:00
1模板是新提的基因组，条带很清晰
2正对照是指？做一个16s PCR可以么
3我们PCR仪不支持touch down，直接拿PCR产物做模板进行二轮PCR？
4由于目的基因序列不是很清楚，只能摸索引物，也用过兼并引物，这组引物算 ...

正对照就是一定能扩增出来的产物。保证基因组和PCR程序的可信性。只要是组成表达的基因都行。
二轮PCR就是拿PCR产物做模板，最好在理论上大小的位置将胶切下回收。
但是引物要缩小一些范围，就是在你第一轮引物的内部再来一对，主要是为了排除非特异，再多扩增一些。有的PCR的产物很少，第二轮或许能看见。祝好。