| 查看: 1058 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
xiaoyu0127铜虫 (小有名气)
|
[求助]
流式 已有1人参与
|
|
|
本人想请教：我打算确认购买的某PE标记抗体的作用，所以打算做一个简单的过程：收细胞-抗体孵育-上流式细胞仪，但是第一次，所以有一些问题还需要请教大家，希望见谅： 1.一般上流式会用到固定剂，请问我这种情况需要吗； 2.实验过程是不是：加刺激到一定时间--用PBS洗2次--弃上清--用100ul含2％BSA的PBS稀释20ul PE流式抗体， 4C避光旋转混匀过夜--预冷PBS洗3遍，用400 ulPBS重悬后，用流式检测和数掘分析，每次计数5000个细胞。 希望大家不吝赐教，不足的地方也请多多包涵  另外，流式细胞的图我目前只能看个大概，如果能分享一些专业的文件，不胜感激 [ Last edited by silicare on 2014-2-22 at 18:45 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
材料与化工（0856）304求B区调剂
已经有7人回复
-
085600材料与化工调剂
已经有8人回复
-
285求调剂
已经有7人回复
-
317求调剂
已经有7人回复
-
一志愿华中师范化学332分求调剂
已经有3人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有25人回复
-
一志愿南昌大学324求调剂
已经有9人回复
-
材料科学与工程 317求调剂
已经有7人回复
-
085701环境工程求调剂
已经有11人回复
-
286分调剂
已经有10人回复
6楼2014-02-23 20:35:48
yang0071
木虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2014-02-21 22:28:05
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢应助 2014-02-22 06:52:36
xiaoyu0127: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-22 14:29:39
wizardfan: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢应助 2014-02-22 06:52:36
xiaoyu0127: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-22 14:29:39
|
1、看你的要求，不是都要固定的，不固定的图形会好看。 但有的染色是必须固定的，所以还是要看你的要求，做的是什么，看高分文章中那些个牛的实验室他们的条件是什么。 2、Buffer可以用PBE（PBS+FBS(BSA)+EDTA)，会好一点。抗体染色看说明书，不是一定要染那么长时间的，长时间有时会出现假阳性。大多数抗体 4度半小时就好了。 至于计数看你的要求了，我们有次做白血病环境中造血干细胞的周期。如果算下来好像记的P2还是P3的数，这还计了不止10万个细胞，那个图也不好看，没几个细胞，还想多记些。那个保存的文件很大。。。 重悬体系不要太大，要不很费时间100-200就好。当然用来圈门的多一点好，要不损失细胞太多，不够折腾的 抗体有钱就买BD的，差点买ebioscience的，再差买biolegend。 据说是一个人做的，做大了卖了。我们主要试过前两个的效果差不多。 除了像PerCp-Cy5.5之类的很偏的染料，BD确实好，其他的像什么PE、FITC、PE-Cy7什么的差不多。没必要费银子。 |
3楼2014-02-22 00:53:12
xiaoyu0127
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 215.4
- 帖子: 107
- 在线: 46.7小时
- 虫号: 2172917
- 注册: 2012-12-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
4楼2014-02-22 14:01:36
