[交流] HS-PEG-COOH和HS-PEG修饰纳米金连接抗体一直交联不上，请大家指导一下！

参照Shuming Nie发表在Nature Biotechnology上的文章“In Vivo tumor targeting and spectroscopic detection with surface-enhanced Raman nanoparticle tags “，用HS-PEG-COOH和HS-PEG修饰纳米金连接抗体，具体方法是：
向2.2 mL, 40 nm Au NPs中加入191 μL, 1 μM HS-PEG-COOH，室温搅拌15 min，再加入711 μL，10 μM HS-PEG，室温继续搅拌3 h。反应完成后，7000 rpm离心三次，重新分散到10 mM, pH 7.2 PBS中。向其中加入5 μL, 10 mM EDC和5 μL, 10 mM NHS,室温搅拌15 min, 离心除去剩余的EDC和NHS，重新分散至上述PBS中。加入2 μL, 1 mg/mL的抗体，继续室温反应2 h。然后置于4 ℃过夜，离心除去未反应的抗体，保存在10 mM, pH 7.4, PBS中备用。
注：1. 使用的HS-PEG-COOH，HS-PEG，EDC和NHS均用超纯水溶解
2. HS-PEG-COOH的分子量约为3500，HS-PEG的分子量约为2000。我注意到参考文献中使用的HS-PEG-COOH分子量小于HS-PEG的，不知道这会不会有影响？

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1楼2014-02-21 16:31:47

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毛毛雨6956

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引用回帖:

5楼: Originally posted by seallinsky at 2014-02-22 23:11:28
sigma的问题也不少，至少HS-PEG-COOH是一个很关键的环节，如果不成功，从原料上排查是必须的。其次，你还要确定是否蛋白有较多的氨基，如果氨基不多（比如K），N末端暴露的机会并不大...

非常感谢您的建议！我尽快排查下原料。