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HS-PEG-COOH和HS-PEG修饰纳米金连接抗体一直交联不上,请大家指导一下!
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参照Shuming Nie发表在Nature Biotechnology上的文章“In Vivo tumor targeting and spectroscopic detection with surface-enhanced Raman nanoparticle tags “,用HS-PEG-COOH和HS-PEG修饰纳米金连接抗体,具体方法是: 向2.2 mL, 40 nm Au NPs中加入191 μL, 1 μM HS-PEG-COOH,室温搅拌15 min,再加入711 μL,10 μM HS-PEG,室温继续搅拌3 h。反应完成后,7000 rpm离心三次,重新分散到10 mM, pH 7.2 PBS中。向其中加入5 μL, 10 mM EDC和5 μL, 10 mM NHS,室温搅拌15 min, 离心除去剩余的EDC和NHS,重新分散至上述PBS中。加入2 μL, 1 mg/mL的抗体,继续室温反应2 h。然后置于4 ℃过夜,离心除去未反应的抗体,保存在10 mM, pH 7.4, PBS中备用。 注:1. 使用的HS-PEG-COOH,HS-PEG,EDC和NHS均用超纯水溶解 2. HS-PEG-COOH的分子量约为3500,HS-PEG的分子量约为2000。我注意到参考文献中使用的HS-PEG-COOH分子量小于HS-PEG的,不知道这会不会有影响? |
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金纳米棒及修饰 | 羧基活化EDC,NHS |
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