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毛毛雨6956

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] HS-PEG-COOH和HS-PEG修饰纳米金连接抗体一直交联不上，请大家指导一下！

参照Shuming Nie发表在Nature Biotechnology上的文章“In Vivo tumor targeting and spectroscopic detection with surface-enhanced Raman nanoparticle tags “，用HS-PEG-COOH和HS-PEG修饰纳米金连接抗体，具体方法是：
向2.2 mL, 40 nm Au NPs中加入191 μL, 1 μM HS-PEG-COOH，室温搅拌15 min，再加入711 μL，10 μM HS-PEG，室温继续搅拌3 h。反应完成后，7000 rpm离心三次，重新分散到10 mM, pH 7.2 PBS中。向其中加入5 μL, 10 mM EDC和5 μL, 10 mM NHS,室温搅拌15 min, 离心除去剩余的EDC和NHS，重新分散至上述PBS中。加入2 μL, 1 mg/mL的抗体，继续室温反应2 h。然后置于4 ℃过夜，离心除去未反应的抗体，保存在10 mM, pH 7.4, PBS中备用。
注：1. 使用的HS-PEG-COOH，HS-PEG，EDC和NHS均用超纯水溶解
2. HS-PEG-COOH的分子量约为3500，HS-PEG的分子量约为2000。我注意到参考文献中使用的HS-PEG-COOH分子量小于HS-PEG的，不知道这会不会有影响？
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1楼 2014-02-21 16:31:47
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
毛毛雨6956: 金币+1 2014-02-21 18:59:48
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~
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2楼2014-02-21 17:01:16
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seallinsky

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
毛毛雨6956: 金币+1 2014-02-22 12:19:43
怀疑HS-PEG-COOH没有羧基。。。要不拿HS-PEG-COOH打个红外看看？
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3楼2014-02-22 01:33:13
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毛毛雨6956

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by seallinsky at 2014-02-22 01:33:13
怀疑HS-PEG-COOH没有羧基。。。要不拿HS-PEG-COOH打个红外看看？

在sigma新买的PEG也会出现这个问题吗？
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4楼2014-02-22 12:20:56
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seallinsky

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
毛毛雨6956: 金币+2 2014-02-23 13:05:58
引用回帖:
4楼: Originally posted by 毛毛雨6956 at 2014-02-22 12:20:56
在sigma新买的PEG也会出现这个问题吗？...

sigma的问题也不少，至少HS-PEG-COOH是一个很关键的环节，如果不成功，从原料上排查是必须的。其次，你还要确定是否蛋白有较多的氨基，如果氨基不多（比如K），N末端暴露的机会并不大
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5楼2014-02-22 23:11:28
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anlongstar

木虫 (文坛精英)
★
毛毛雨6956: 金币+1 2014-02-23 13:07:38
帮顶
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6楼2014-02-22 23:25:11
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毛毛雨6956

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by seallinsky at 2014-02-22 23:11:28
sigma的问题也不少，至少HS-PEG-COOH是一个很关键的环节，如果不成功，从原料上排查是必须的。其次，你还要确定是否蛋白有较多的氨基，如果氨基不多（比如K），N末端暴露的机会并不大...

非常感谢您的建议！我尽快排查下原料。
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7楼2014-02-23 13:07:22
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琳琅哈哈

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们实验室做的是在SH-PEG上加上PAA,再加上抗体就可以。。。。。
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9楼2014-03-26 10:05:55
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邪恶的大肉丸

金虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 琳琅哈哈 at 2014-03-26 10:05:55
我们实验室做的是在SH-PEG上加上PAA,再加上抗体就可以。。。。。

求教，求文献
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10楼2014-03-26 15:42:53
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ocean1982

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 毛毛雨6956 at 2014-02-23 13:07:22
非常感谢您的建议！我尽快排查下原料。...

支持！希望尽快发现问题所在
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11楼2014-08-22 21:58:36
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亦岳98638楼
2014-02-23 13:31  
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