| 查看: 779 | 回复: 1 | |||
[求助]
求助：猴的外周血淋巴细胞培养问题 已有1人参与
|
|
最近在做猴的外周血淋巴细胞转化实验，作为新手，有很多问题要向各位有经验的朋友请教。 我用的是TBD的猴单个核细胞分离液。无菌注射器采血，转移至15mL离心管后进行分离。组织稀释液1:1稀释后，转移至淋巴细胞分离液上层，2000rpm离心30min。离心后有的看不出来白细胞层，就吸出大部分中间白色雾状层。加洗涤液1500rpm离心10min，沉淀重复洗涤2次。1640培养基重悬种板用于PHA刺激的转化实验。 我的问题主要在于： 1.将血液加到淋巴细胞分离液上层离心后，很多时候都看不到明显的白细胞层。而且中间分离液层有些悬有红细胞，这样提取的就混有较多红细胞。如何才能较少红细胞的量？ 2.在细胞种板后我发现几乎每个孔都有杆状的东西，应该是细菌。。作为细胞族这是无法容忍的呀。请问各位有经验的大神，如何才能保证无菌？因为我的PBMC分离过程中都是细胞房外，这个过程有哪些步骤应该注意以防染菌？配制肝素钠抗凝剂的时候我没有用无菌水。。在称量肝素钠和PHA的时候这些药物都是暴露在空气中的，会不会也会增加染菌的几率呢？ 3.可能因为染菌，我的PHA 10μg/mL刺激72h后细胞增殖率才＞100%，并没有达到文献报道的200%~300%或更高。请问各位做过这个实验的朋友一般PHA刺激60多个小时和72个小时有没有差别？PHA刺激的话增殖率的正常范围是多少？ |
回复此楼» 猜你喜欢
291求调剂
已经有7人回复
-
300求调剂
已经有8人回复
-
求调剂推荐
已经有7人回复
-
289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校)
已经有4人回复
-
0854求调剂
已经有13人回复
-
初试324 中药学 一志愿天中医 求调剂
已经有3人回复
-
药学求调剂
已经有14人回复
-
327求调剂
已经有27人回复
-
急需调剂
已经有5人回复
-
271求调剂
已经有33人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 淋巴细胞培养基的配方
已经有4人回复
- 多种细胞的培养方法
已经有53人回复
- Ebook__《人类遗传与优生》(第2版)·丁显平主编
已经有97人回复
- 外周血淋巴细胞凋亡
已经有3人回复
- 影响HPLC分离度的各种因素，并说明如何提高分离度
已经有7人回复
- 细胞消化液D-Hanks还是PBS？
已经有10人回复
- 分离外周血淋巴细胞时可以用PBS代替Hanks液吗
已经有4人回复
- 细胞培养时用PBS冲洗细胞如何降低细胞损失
已经有3人回复
- 【求助/交流】请问哪位大侠知道Neutral Comet Assay是什么试验？
已经有4人回复
yipan 
铜虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 16515.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4199
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
2楼2014-04-18 16:56:39
