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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)

[求助] 乳腺癌干细胞分离 已有1人参与

跪求各位大神,弱弱地问一句,有人从乳腺癌细胞系BT474中分离出乳腺癌干细胞吗?急急急
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
癌细胞分离干细胞
有前途啊
2楼2014-02-17 20:50:40
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

你有确定的特异的表面marker吗?要不就常用的 CD44  CD133  SP  等等。  有的话用流式或磁珠分
要不做肿瘤干细胞球,养出来
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
3楼2014-02-17 22:04:44
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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2014-02-17 22:04:44
你有确定的特异的表面marker吗?要不就常用的 CD44  CD133  SP  等等。  有的话用流式或磁珠分
要不做肿瘤干细胞球,养出来

有marker,CD44,CD24,ESA,我想用流式,但具体的步骤不知道该怎么做?
4楼2014-02-18 18:46:18
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

第一,选抗体,要选对的抗体,抗体的克隆号很重要,如果不对有时做不出来
第二,标抗体,设对照,阴性,如果不熟加个同型
第三,有条件的话,先磁珠粗分,然后流式细分----磁珠的看说明书,有磁铁、架子、柱子自己就能搞定。   流式要是没做过,就费点事,找会做的,圈门、去粘连、调drop、调分选通道、再看看回收效率,定了模板,run就行了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
5楼2014-02-18 22:27:05
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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by telomerase at 2014-02-18 22:27:05
第一,选抗体,要选对的抗体,抗体的克隆号很重要,如果不对有时做不出来
第二,标抗体,设对照,阴性,如果不熟加个同型
第三,有条件的话,先磁珠粗分,然后流式细分----磁珠的看说明书,有磁铁、架子、柱子自己 ...

大神,能发一份比较详细的protocol给我吗?跪求!
6楼2014-02-19 10:39:33
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

因为我是做造血那块的,小鼠的maker挺多,每种抗体我们都是依照老外最初的文献报道的抗体克隆号 买的,如果买错了会做不出来,这个我们遇到过
关于protocol,因为做的东西不同,给你也没用,你感兴趣就看下nature protocol上的 Adult mouse hematopoietic stem cells: purification and single-cell assays。我们配lin用的他们上面讲的比例。
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
7楼2014-02-19 20:43:37
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