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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 乳腺癌干细胞分离
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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)

[求助] 乳腺癌干细胞分离 已有1人参与

跪求各位大神，弱弱地问一句，有人从乳腺癌细胞系BT474中分离出乳腺癌干细胞吗？急急急
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乐
1楼 2014-02-17 15:04:49
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
癌细胞分离干细胞
有前途啊
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2楼2014-02-17 20:50:40
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
你有确定的特异的表面marker吗？要不就常用的 CD44  CD133  SP  等等。  有的话用流式或磁珠分
要不做肿瘤干细胞球，养出来
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
3楼2014-02-17 22:04:44
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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2014-02-17 22:04:44
你有确定的特异的表面marker吗？要不就常用的 CD44  CD133  SP  等等。  有的话用流式或磁珠分
要不做肿瘤干细胞球，养出来

有marker，CD44，CD24，ESA，我想用流式，但具体的步骤不知道该怎么做？
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乐
4楼2014-02-18 18:46:18
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
第一，选抗体，要选对的抗体，抗体的克隆号很重要，如果不对有时做不出来
第二，标抗体，设对照，阴性，如果不熟加个同型
第三，有条件的话，先磁珠粗分，然后流式细分----磁珠的看说明书，有磁铁、架子、柱子自己就能搞定。   流式要是没做过，就费点事，找会做的，圈门、去粘连、调drop、调分选通道、再看看回收效率，定了模板，run就行了。
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wulelexinhun
我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
5楼2014-02-18 22:27:05
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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by telomerase at 2014-02-18 22:27:05
第一，选抗体，要选对的抗体，抗体的克隆号很重要，如果不对有时做不出来
第二，标抗体，设对照，阴性，如果不熟加个同型
第三，有条件的话，先磁珠粗分，然后流式细分----磁珠的看说明书，有磁铁、架子、柱子自己 ...

大神，能发一份比较详细的protocol给我吗？跪求！
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乐
6楼2014-02-19 10:39:33
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
因为我是做造血那块的，小鼠的maker挺多，每种抗体我们都是依照老外最初的文献报道的抗体克隆号 买的，如果买错了会做不出来，这个我们遇到过
关于protocol，因为做的东西不同，给你也没用，你感兴趣就看下nature protocol上的 Adult mouse hematopoietic stem cells: purification and single-cell assays。我们配lin用的他们上面讲的比例。
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
7楼2014-02-19 20:43:37
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